产品描述
Hieff NGS® MaxUp Dual-model mRNA Library Prep Kit for Illumina®是针对Illumina®高通量测序平台专门研发的用于mRNA转录组文库构建试剂盒,本试剂盒cDNA二链合成模块配有两种buffer,客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-1μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、链双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增,总RNA样品最终转化为适用于Illumina®平台测序的文库。
试剂盒包含三个独立模块,BOX-I的核心为纯化mRNA所需的poly(A)磁珠。BOX-II包含mRNA片段化试剂,反转录试剂,常规和链特异性dscDNA合成所需的所有试剂。其中链特异性二链合成buffer中将dTTP替换为dUTP,使cDNA第二链中掺入dUTP,而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板,实现链特异性。BOX-III实际上是一个高效的微量DNA文库构建试剂盒,来自我公司的Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
保存方法
冰袋运输。效期一年。存储温度如下,切不可搞错!
Box I:2-8℃保存;Box II:-20℃保存;Box III:-20℃保存。
注意事项
一、 关于操作
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后置于冰上待用。
3.推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。
4.请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用ThermoFisher公司的RNAZapTM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
5.PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染,进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离;配备文库构建专用移液器等设备;定时对各实验区域进行清洁(推荐使用ThermoFisher公司的DNAZapTM高效核酸去除喷雾),以保证实验环境的洁净度。
二、应用范围
本试剂盒适用于起始模板量为10-1000 ng(体积≤50 μL)的高质量动物、植物和真菌等真核生物的总RNA。如初始RNA浓度偏低,体积超过50 μL,可使用Hieff NGS® RNA Cleaner磁珠进行浓缩。RNA需通过Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片检测,RIN值要求>7,以保证mRNA有完整的poly(A)尾结构。
本试剂盒的mRNA分离模块使用的是oligo d(T)磁珠,只有带poly(A)尾的mRNA才能被提取;其他不具poly(A)尾的mRNA,如非编码RNA、无poly(A)尾的mRNA等不能适用本试剂盒。此外,FFPE样本中的mRNA降解严重,通常无完整的poly(A)尾结构,故亦无法使用本试剂盒进行建库。
本试剂盒所制备文库可进行多种RNA-Seq应用,包括:
基因表达(gene expression)
单核苷酸变异检测(single nucleotide variation discovery)
基因融合鉴定(gene fusion identification)
剪切变异体分析(splice variant analysis)
关键字: MAXUPMRNA 建库试剂盒_基因_
上海翊圣生物科技有限公司(Yeasen Biotech Co., Ltd.)成立于2009年,是专注于酶制剂和抗原抗体开发的高新技术型企业,致力于为生命科学研究领域内的科研客户及精准医疗相关行业的工业客户提供高质量的产品和优质的服务。
公司现阶段建设有分子、蛋白、细胞和免疫四大技术平台,涵盖全面丰富的产品线,包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆转录相关制剂、克隆试剂盒、高通量测序MaxUP系列DNA和RNA建库试剂盒、细胞培养、支原体检测/预防/去除试剂,以及体外诊断相关的酶原料、试剂和磁珠等3000多种试剂和试剂盒,服务于全国各级高校、研究所、医院、第三方检测机构、生物医药公司等2.5万家客户,助力发表高质量SCI论文1000余篇。
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