产品描述
Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是翊圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo（dT）的微米级顺磁性微球，通过与带有poly（A）尾巴的mRNA相结合，将mRNA从0.1-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。
产品组分
运输与保存方法
冰袋运输。
2-8℃保存，有效期一年。避免冷冻！
使用方法
一、 自备材料
磁力架，Nuclease-free离心管。
二、操作流程
图1 mRNA纯化试剂盒操作流程
二、 操作步骤
3.1 实验前准备
将mRNA Capture Beads从4℃取出，静置使其温度平衡至室温（约30 min）。
3.2 样本准备
① 在一个Nuclease-free PCR管中，用Nuclease-free water将0.1-4 μg总RNA稀释至50 μL。
② 将稀释的RNA置于PCR仪中，65℃，5 min；4℃，hold，使RNA变性，冰上放置备用。
3.3 mRNA与磁珠的结合
① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠，吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 的变性RNA样品中，用移液器反复吹打6次，使其充分混匀。
② 室温孵育5 min，使mRNA与磁珠完全结合。
③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，使mRNA与总RNA分离，吸除全部上清。
3.4 样本的洗涤
① 将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，吸除全部上清。
③ 重复上一步骤，共洗涤两次。
3.5 mRNA样本轮洗脱
① 将样品从磁力架上取出，加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 将样品放置于PCR仪中，80℃，2 min；25℃，hold，将mRNA洗脱下来。
3.6 mRNA与磁珠的再次结合
① 加入50 μL Beads Binding Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。
② 室温孵育5 min，使mRNA结合到磁珠上。
③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。
3.7 样本的洗涤
将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer，用移液器反复吹打6次彻底混匀，将样品重新放回至磁力架中，室温静置5 min，然后吸除全部上清。
【注】：最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。
3.8 mRNA样本终洗脱
方案一：用于逆转录反应。
将样品从磁力架上取出，加入12 μL Nuclease-free water重悬磁珠，用移液器吹打6次以彻底混匀。将样品置于PCR仪中80℃，2 min后，立即置于磁力架上，室温静置5 min。待溶液澄清后，小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。
方案二：用于RNA文库的构建。
可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer，进行文库构建。
【注】：样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用（建议立即进行后续反应），也可以置于-80℃保存。
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上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是专注于酶制剂和抗原抗体开发的高新技术型企业，致力于为生命科学研究领域内的科研客户及精准医疗相关行业的工业客户提供高质量的产品和优质的服务。
公司现阶段建设有分子、蛋白、细胞和免疫四大技术平台，涵盖全面丰富的产品线，包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆转录相关制剂、克隆试剂盒、高通量测序MaxUP系列DNA和RNA建库试剂盒、细胞培养、支原体检测/预防/去除试剂，以及体外诊断相关的酶原料、试剂和磁珠等3000多种试剂和试剂盒，服务于全国各级高校、研究所、医院、第三方检测机构、生物医药公司等2.5万家客户，助力发表高质量SCI论文1000余篇。
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