产品描述
2×Hieff® PCR Master Mix是即用型的常规PCR预混合溶液,含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及优化的缓冲体系。反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤。本产品中含有优良的稳定剂,在4℃条件下以放置3个月。PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体。
反应体系(50 μL)
反应体系(50 μL) 扩增程序
组分
体积(μL)
循环步骤
温度(℃)
时间
循环数
模板DNA
适量
预变性
94
5 min
1
引物1(10 μM)
2
变性
30 sec
35
引物2(10 μM)
退火
50-60
2×Hieff® PCR Master Mix
25
延伸
72
30 sec/kb
ddH2O
to 50
终延伸
10 min
注:使用前请务必将其彻底混匀。
a)模板使用量:基因组DNA:50~200 ng;质粒DNA:0.1~10 ng。 b)Mg2+浓度:本产品中含有3 mM的MgCl2,适合大部分PCR反应。 c)退火温度:请参考引物的理论Tm值,退火温度可设置低于引物理论值2-5℃。 d)延伸时间:分子鉴定建议30 sec/kb。基因克隆建议60 sec/kb,以保证产物量达到最高。
注意事项
本产品PCR产物不适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。如有需要,请选择本公司产品(货号:10101ES)。 应用实例
图1: 2×Hieff® PCR Master Mix扩增1.2 kb片段。产品分别在-20℃放置1年,4℃放置3个月,25℃放置1个月后均可有效扩增目的片段。模板:拟南芥基因组;退火温度:60℃;延伸时间:40 sec。
上海翊圣生物科技有限公司
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