BAPTA-AM

BAPTA是一种钙选择性螯合剂。它基本的螯合单位和EDTA类似，只是两个脂肪氮被芳香氮所替代。因此，BAPTA在生理pH下不会被质子化。BAPTA的pKa3为5.47，pKa4为6.36。这个特点显示了去质子化的步骤并不包含在Ca的螯合步骤中。由于不受质子的干扰，它的螯合率比EGTA要高很多。BAPTA-AM是BAPTA的乙酰甲酯衍生物，通过AM法，能被轻易负载到细胞中。BAPTA-AM对于细胞内钙离子的监控是非常有用的。

(1) 溶解方法

·配制50 mM stock solution

  例1) 使用100μl DMSO时,(BAPTA-AM的分子量=764.68)

     　50 mmol／L = (X g／764.68) mol／100 × 10-6 L

X g／764.68 = 50 × 10-7 mol

              X =0.003823 g = 3.82 mg

  例2) 使用20mg BAPTA-AM时,

     　50 mmol／L = (20 mg／764.68) mol／X L

         　     X =0.00002615 ÷ 0.05 = 523μl

  例3) 使用5mg BAPTA-AM时,

     　50 mmol／L = (5 mg／764.68) mol／X L

        　      X =0.000006538 ÷ 0.05 = 130μl

例4) 使用25mg BAPTA-AM时,

     　50 mmol／L = (25 mg／764.68) mol／X L

             　 X =0.00003269 ÷ 0.05 = 654μl

　*保存stock solution的方法和保存时间

   由于AM体遇水容易分解。所以我们推荐现配现用。

   使用无水DMSO,再冷冻的条件下,可以保存约1-2个月。

(2) 使用方法

 ·稀释stock solution,添加细胞。

   稀释浓度:少的 6 – 8 μM , 多的50 μM

    例1) 8 μM, 使用10μl 50 mM BAPTA-AM stock solution

     　　8 μM = 50 mM ×10μl / Xμl

        　 X = 62,500μl = 62.5 ml

    例2) 50 μM, 使用10μl 50 mM BAPTA-AM stock solution

     　　50 μM = 50 mM ×10μl / Xμl

        　　 X = 10,000μl = 10.0 ml

   *关于细胞的量,不同的细胞使用不同的细胞量。

    一般来说,和Fura2-AM,Fluo3-AM一样的量。

论文里面有如下的条件。请参考。

   例1) 1.75×10-4 cells/cm2, 25 μM BAPTA-AM

 ·培养

   培养时间:20 – 60 分钟