Cy5.5 (Cyanine 5.5) 是一种发近红外(NIR)荧光的花青素荧光染料。它的消光系数高,荧光也很亮,并且对pH不敏感,并且由于它的荧光波长(Em:~700nm)恰好处于肌体组织近红外窗口 I 的区域(肌体的血液,体液和组织此区域背景荧光弱,而长波长穿透性强),所以Cy5.5常应用于小动物活体体内成像中。 Cy5.5可以用来标记蛋白,抗体,多肽,纳米粒等,它最常见的使用是标记核酸分子(DNA和RNA)。
NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester(NHS),succinimidyl ester(SE))是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy5.5分子中的羧基,让它可以和目标生物分子上的胺基(主要伯胺)反应生成稳定的酰胺键,从而把Cy5.5分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白,抗体,多肽表面的常见官能团(来自于赖胺酸侧链),Cy5.5-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基,只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy5-NHS反应。
Cy5.5-NHS活化酯的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素(sulfonated cyanine),即sulfo-Cy5.5-NHS活化酯。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。
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