名称 G418溶液(Geneticin,20mg/ml) 规格 10ml 保存 -20℃ 避光保存,有效期24个月 产品简介 新霉素(geneticin, G418)又称遗传霉素,是一种氨基糖苷类抗生素, 是细胞稳定转染最常用的抗性筛选试剂。G418能阻断蛋白质合成,对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细胞均具有氨基糖苷类毒性,用于真核细胞从转座子Tn5和Tn601稳定转染新霉素(neo)抗性基因的选择和维持。经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。
G418溶液经过滤除菌,一般工作浓度为50~1000ug/ml不等,然而不同类型的细胞需要根据实验确定浓度。在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO细胞)中,一旦筛选出稳定细胞株后,无需加入G418继续培养。
Phygene G418溶液主要由G418、HEPES等组成,过滤除菌。
G418溶液已经0.22μm抽滤除菌,可以直接使用。
细胞系或机体
G418推荐浓度(μg/ml)
中国仓鼠卵巢细胞
700-800
Madin-Darby犬肾细胞
500
人上皮A431细胞
400
猿CV-1细胞
盘基网柄菌属
10-35
植物
10
酵母
125-500
操作步骤 (仅供参考) 1、 由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同批次的G418的活性液不同,所以在筛选之前,需要确定G418的筛选浓度,一般在50~1000μg/ml 范围内进行筛选。 2、 将细胞制备成细胞悬液,并稀释到1000个/ml。 3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml),选择在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。 注意事项 1、 尽量减少反复冻融的次数,以免失效。 2、 基因转染到细胞内要一段时间才能表达出蛋白质, 所以筛选不能太早。 3、 筛选也不宜太迟,一般要在转染24h之后才开始加G418筛选。因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大,增值较慢,时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没,最终导致筛选不出阳性克隆。 4、 随着细胞代谢,G418的浓度和活性都会下降,应每3~5天更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200μg/ml。 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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