细菌细胞总蛋白提取试剂盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit) 规格 50T 存储 Store at 4℃ (本试剂在室温干燥条件下,可保存6 个月。溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50%甘油2-8℃保存) 试剂盒组成 细菌细胞蛋白裂解液 50ml 细菌细胞漂洗液 120ml 溶菌酶贮存液 3ml 100×蛋白酶抑制剂 0.6ml 50% 甘油 10ml 说明书 1份 产品简介 1、 总论:经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成:清洗组织或细胞;裂解细胞;离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物(可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液); 通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化,得到目的产物蛋白。 2、 本试剂使用温和的非离子型去污剂,适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物学活性,可进行 IP,Western Blot,蛋白纯化等下游操作。 使用说明 1、离心收集细菌细胞, 按照每克湿菌取用 5-6ml 细菌细胞漂洗液的比例,于 20℃~37℃将细胞悬浮起来后,4℃,12000g,1-2min 离心除去细菌细胞漂洗液,漂洗2次。(离心只是收集细胞,转速、时间可自行调整。) >如果细菌细胞漂洗液不够,也可以用 TE buffer(H=7.4 --7.6)代替。 2、离心除去细菌细胞漂洗液后,按每克湿菌细胞,加入 5ml细菌细胞蛋白裂解液,250ul溶菌酶贮存液和50ul 100×蛋白酶抑制剂,混悬细菌细胞样品。 3、混旋或颠倒试管几次后,20℃~37℃温育 10~20 分钟,同时轻轻摇动。 >若蛋白表达量较低,建议结合超声粉碎,置冰上后,采用300w,10s 超声/10s 间隔,超声20min,至菌液变清或者变色。 >若目的蛋白不稳定,可冰浴中孵育,且时间可以减少,裂解液内加入 0.2 倍体积 50%甘油也可以稳定目的蛋白。 4、细胞破碎后的匀浆液,根据您不同需要可以在10000g 离心10min到100000g 离心1h范围离心。沉淀弃去。上清即为含有目的蛋白质的粗提物。 注意事项 若目的蛋白不稳定,冰浴中孵育时间可以减少甚至取消,裂解液内加入0.2 倍体积50%甘油也可以稳定目的蛋白。 *请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项!
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