SK-N-BE(2) epithelioid cells人神经母细胞瘤细胞系

"SK-N-BE(2) epithelioid cells人神经母细胞瘤细胞系
细胞背景资料：１９７２年１１月从一们多次化疗及放疗的扩散性神经母细胞瘤患儿骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(２)神经母细胞瘤细胞株。 该细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性。 有报道称SK-N-BE(２)细胞的饱和浓度超过１x１０６细胞/平方厘米。细胞形态多样，有的有长突触，有的呈上皮细胞样。 细胞会聚集，形成团块并浮起
细胞形态：上皮细胞样
正确的细胞复苏需知事项：细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢？没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢？细胞活力和形态检查的作用何在？活力检查——千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查——检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液——在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至７０%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根据不同的细胞类型调整)；冻存液——用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择最合适的冻存液(常用的冻存液成分有)：５-１０% DMSO——注意确保DMSO不含有其他的毒性物质；５-１５%甘油；如果细胞在无血清培养基内生长，应在５０%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长２４小时)内冻存和复苏。在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过１.５ml。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以最快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的！还有一个最重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题！细胞正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要；其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做好防冻工作，戴上护目镜；尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。
OVCAR4细胞系相关产品：PL45细胞、Duke University 145细胞、H-2195细胞
HEH2细胞系相关产品：Walker/LLC-WRC256细胞、SNU119细胞、Huh-7.5细胞
SEM细胞系相关产品：LTEP-a2细胞、OC-3-VGH细胞、WM115细胞
细胞生长：贴壁
SK-N-BE(2) epithelioid cells人神经母细胞瘤细胞系
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
最近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，１XPBS漂洗两次，加入１mlEDTA-Tripsin（１００mm皿为例），３７度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代最重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-２、A５４９、Hela、SGC-７９０１几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理５-６min，C２C１２、COS-７、NIH-３T３比较容易脱落，２min足矣，P１９Cl６和２９３细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
细胞传代方法：１：２传代
H-1693细胞系相关产品：3 LL细胞、Hs 274细胞、IHH4细胞
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细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
SK-N-BE(2) epithelioid cells人神经母细胞瘤细胞系
细胞生长特性：贴壁生长
细胞形态特性：上皮细胞样
常见细胞培养中一些问题总结：１)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为５%-１５%，不要低于５%或高过２０%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为１０%，可以适量加减；２)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；３)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；４)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；５)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；６)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
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