WM266-4 epithelioid cells人黑素瘤细胞系

"WM266-4 epithelioid cells人黑素瘤细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
C166细胞系相关产品：MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII细胞、NCI-SNU-601细胞、NCI-H847细胞
NCIH1373细胞系相关产品：H774细胞、BAR-T细胞、OVTOKO细胞
IM-95细胞系相关产品：A-204细胞、AMJ2-C8细胞、JB6 Cl 30-7b细胞
细胞生长：贴壁
WM266-4 epithelioid cells人黑素瘤细胞系
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
最近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，１XPBS漂洗两次，加入１mlEDTA-Tripsin（１００mm皿为例），３７度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代最重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-２、A５４９、Hela、SGC-７９０１几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理５-６min，C２C１２、COS-７、NIH-３T３比较容易脱落，２min足矣，P１９Cl６和２９３细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
细胞传代方法：１：２传代
OE-19细胞系相关产品：Nthy-ori 3.1细胞、CTLA4Ig-24细胞、JM-1细胞
MODE-K细胞系相关产品：RC-4B细胞、GM03190A细胞、H-69细胞
PG [Human lung carcinoma]细胞系相关产品：NCIH2009细胞、LWnt3A细胞、CL11细胞
HuLEC-5a细胞系相关产品：AG06814-M细胞、OCI-AML-5细胞、NBLAN5T细胞
MV-4:11细胞系相关产品：SUM-159-PT细胞、FHs74 Int细胞、H-1755细胞
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
WM266-4 epithelioid cells人黑素瘤细胞系
细胞生长特性：贴壁生长
细胞形态特性：详见细胞说明书
培养细胞真的不难，最关键几点：１)所有的东西使用，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；２)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；３)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；５)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；６)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?１)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；３)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；４)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；５)晚上离开的时候给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；６)是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
U-CH1细胞系相关产品：CAL33细胞、Rin-M-5F细胞、CT26WT细胞
A3细胞系相关产品：SF-763细胞、X63-Ag8-653细胞、NPA87细胞
MESSA细胞系相关产品：M109细胞、KYSE-70细胞、L1210细胞
H-EMC-SS细胞系相关产品：BSC-40细胞、HS 683T细胞、U-373 MG细胞
U251MG细胞系相关产品：3AO细胞、Cattle chondrocytes细胞、MCF10A细胞
COLO678细胞系相关产品：P30 OHK细胞、PANC403细胞、H9细胞
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NPC-TW-039细胞系相关产品：MDAMB231细胞、OV433细胞、LWnt3A细胞
CAL 85-1细胞系相关产品：Intestinal Epithelioid Cell line No. 18细胞、HIBEpiC细胞、SCC-7细胞
Ramos 2G6.4C10细胞系相关产品：NSI/1-Ag4-1细胞、Hx147细胞、no.11细胞
HC11细胞系相关产品：MM6细胞、HEC-251细胞、NUGC4细胞
K299细胞系相关产品：CL34细胞、H-2347细胞、NK-92细胞
Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1细胞系相关产品：Hs600T细胞、NCI-SNU-182细胞、NRK clone 52E细胞
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NCIH2073细胞系相关产品：BCECs细胞、L23/P细胞、ECC1细胞
Hs-852-T细胞系相关产品：U-343MG细胞、H-295R细胞、ACC2细胞
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HEK 293A细胞系相关产品：ESC-410细胞、LC-1/sq细胞、RGC5细胞
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H1666_DA细胞系相关产品：RK13细胞、NCI-SNU-387细胞、ARO细胞
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Ra No. 1细胞系相关产品：Hs 852.T细胞、Li-7细胞、TCC-SUP细胞
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C3H/10T1/2-clone8细胞系相关产品：MSF细胞、SW-962细胞、NSC-34细胞
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Hs 683细胞系相关产品：RDES细胞、Hs606细胞、HuH-6细胞
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AZ521细胞系相关产品：3T6 Swiss Albino细胞、X63Ag8-653细胞、Uhth-74细胞
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786O细胞系相关产品：OCI-Ly 1细胞、NCI/ADR-RES细胞、NCI-H441-4细胞
HANK细胞系相关产品：BJAB-1细胞、HCT/FU细胞、SUP-B1细胞
PT-K75细胞系相关产品：KBM5细胞、NCIH548细胞、HMVEC细胞
NCIH2405细胞系相关产品：H-865细胞、SHG 44细胞、143TK-细胞
CT 26细胞系相关产品：NCI/ADR-RES细胞、CMT 64细胞、GM-346细胞
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H-209细胞系相关产品：253J-BV细胞、UCLA RO-81A-1细胞、KS-1 [Human glioblastoma]细胞
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UO-31细胞系相关产品：Human Kidney-2细胞、GM637A细胞、LM8细胞
MESSA细胞系相关产品：M109细胞、4-1st细胞、HL-60 Clone 15细胞
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