"MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌细胞系 细胞背景资料:该细胞系由CailleauR在1976年从一名48岁的患有转移性乳腺癌的白人女性的心包渗出液中分离建立的。该细胞表达FGF的受体。 细胞形态:上皮细胞样 细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。 Hs 822.T细胞系相关产品:SK-N-MC细胞、CV 1细胞、GCT0404细胞 HDQ-P1细胞系相关产品:HCT.116细胞、A-673细胞、HIEC细胞 HUT 28细胞系相关产品:NCIH1666细胞、SNU-475细胞、MEG-01细胞 细胞生长:贴壁 MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌细胞系 细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源 细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支) 最近在培养细胞时,发现其状态不是很好,很容易扎堆生长,用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来,很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的,传代的第二天,有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢?你好,我养的细胞和你一样,消化下来也是一团的,但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀,分皿后在镜下看一看,移动培养皿的时候尽量动作轻,避免晃动。细胞生长挺快,那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能:一、细胞消化后吹打不均匀,造成细胞成团生长:二、细胞细化太过,细胞成片脱落,吹打时没有受力点,细胞聚团生长。解决办法:根据细胞生长的情况进行多次消化,将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养:一般步骤为:真空泵吸走培养基,1XPBS漂洗两次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿为例),37度放置数分钟,轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落,加入适量血清,以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,离心后加入新鲜培养基,按比例转移至新皿。细胞的传代最重要的是胰酶处理时间,若胰酶处理太久,容易造成细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长,一般处理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落,2min足矣,P19Cl6和293细胞贴壁不紧,可在PBS漂洗后,直接换新鲜培养基打散。 细胞传代方法:1:2-1:4传代;2-3天换液1次 no-11细胞系相关产品:MiaPaca.2细胞、KMB-17细胞、HRIF细胞 MD Anderson-Metastatic Breast-231细胞系相关产品:95D细胞、Hs 940.T细胞、UACC812细胞 NCIH847细胞系相关产品:SUPM2细胞、Pa16C细胞、H23细胞 BpRcl细胞系相关产品:HTR-8/SV neo细胞、NCI-H508细胞、ARH 77细胞 A549/ATCC细胞系相关产品:DU-4475细胞、ReNcell CX细胞、CCD-841CoTr细胞 细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌细胞系 细胞生长特性:贴壁生长 细胞形态特性:上皮样;多角形 细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。 CAL-51细胞系相关产品:WEHI 164细胞、HMVEC细胞、MC3T3细胞 EFM-19细胞系相关产品:SKMES细胞、RD-ES细胞、HT-115细胞 Colon-26细胞系相关产品:LN 382细胞、PM6细胞、COLO 357细胞 COLO679细胞系相关产品:EPC细胞、Hs-940细胞、SCH细胞 HCS2/8细胞系相关产品:SUSM-1细胞、CHP126细胞、H-2227细胞 HBEpiC细胞系相关产品:RWPE-2细胞、SKO3细胞、GM03571细胞 NIH:OVCAR-8细胞系相关产品:X63-Ag8.653细胞、QBI-HEK 293A细胞、IEC-6细胞 Kupffer细胞系相关产品:Hs-729-T细胞、HN 4细胞、SUM 190PT细胞 NCI-H78细胞系相关产品:SK LU 1细胞、PK-136细胞、HEL-1细胞 BC-PAP细胞系相关产品:NMCG-1细胞、QG56细胞、WM 239A细胞 MDA-MB-453 epithelioid cells人乳腺癌细胞系 Mahlavu细胞系相关产品:Sp2/0-Ag14细胞、MB468细胞、HO-1-N-1细胞 TC-1 [Mouse lung]细胞系相关产品:Hs 274细胞、HuH-28细胞、NCIH2023细胞 NALM-6-M1细胞系相关产品:HCC-15细胞、KRCY细胞、LAD 2细胞 OVCAR420细胞系相关产品:SiHa细胞、MDA MB 134VI细胞、SF767细胞 SW260细胞系相关产品:OVCAR-10细胞、PLMVEC细胞、PG-4(S+L-)细胞 KTA-7细胞系相关产品:Y3-Ag 1.2.3细胞、Colon-38细胞、HOS细胞 KTA-7细胞系相关产品:Y3-Ag 1.2.3细胞、Colon-38细胞、HOS细胞 HL-7702细胞系相关产品:Ly3细胞、H508细胞、BPH1细胞 PLB-985细胞系相关产品:NCI-H676细胞、CAL 12细胞、KMH2细胞 HEK;293细胞系相关产品:HCC1954 BL细胞、B16/F1细胞、PaTu 8988 S细胞 MLO-Y4细胞系相关产品:HELF细胞、Hs 832(C).T细胞、Jiyoye (P-2003)细胞 WERI-Rb-1细胞系相关产品:HDLM-2细胞、RT112细胞、UM-UC-1细胞 KYSE 30细胞系相关产品:P3HR1细胞、EA.Hy926细胞、PCI-04B细胞 WEHI 164细胞系相关产品:HFLS-OA细胞、H-250细胞、Neuro-2a细胞 Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1细胞系相关产品:LIM 1215细胞、HMC-1细胞、HuH28细胞 Adeno-293细胞系相关产品:VMRC-LCD细胞、TSCC1细胞、8402细胞 J774.A1细胞系相关产品:DMS114细胞、UMR 106细胞、RGC-6细胞 HEK293A细胞系相关产品:NK62a细胞、Panc 4.03细胞、L-540细胞 NS1-Ag4细胞系相关产品:NCI-H2196细胞、OCI-Ly 3细胞、SW-626细胞 QGP1细胞系相关产品:NCI-H220细胞、MT-2J细胞、LS-180细胞 KAT5细胞系相关产品:HTori-3.1细胞、MHH-CALL2细胞、H-1404细胞 H-1915细胞系相关产品:S180细胞、NPC-TW039细胞、Pt-K2细胞 aTC1-6细胞系相关产品:WM115mel细胞、P31FUJ细胞、RCC-4细胞 EL 4细胞系相关产品:L5178Y细胞、Hs 294T细胞、HuH-28细胞 GM15452细胞系相关产品:Hs 343.T细胞、Human Hepatocyte Line 5细胞、COLO 320细胞 2780细胞系相关产品:aTC1 Clone 6细胞、T-47D细胞、HCC-1428细胞 OVCA8细胞系相关产品:GM03320细胞、RCC-10细胞、hA549细胞 CAOV4细胞系相关产品:G-292, clone A141B1细胞、Hs 766细胞、Panc08.13细胞 NTera-2D1细胞系相关产品:HuH7细胞、NALM-6-M1细胞、TKB1细胞 MIN-6细胞系相关产品:SCC090细胞、DCS细胞、Caov-4细胞 COV 434细胞系相关产品:HEK/EBNA细胞、SKNBE2C细胞、HT1197细胞 H740细胞系相关产品:Neuro2a细胞、SUM-190细胞、IOSE80细胞 OCI AML4细胞系相关产品:CCRF细胞、H-1770细胞、T-HEECs细胞 Uhth-74细胞系相关产品:HOS (TE85, Clone F5)细胞、P30-OHK细胞、OSKM-1细胞 CEM-CCRF (CAMR)细胞系相关产品:H-358细胞、SKM-1细胞、Epstein-Barr-3细胞 HO-1-N-1细胞系相关产品:PGLH7细胞、Kobe university Oral Squamous Cell culture-2细胞、HUSMC细胞 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