KMB-17 epithelioid cells人二倍体细胞系

"KMB-17 epithelioid cells人二倍体细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较高的细胞亚群。一种简单的消化传代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，弃之，再加入适量胰酶作用１０s-４０s(根据细胞消化的难易程度)，弃之，这样依赖残余的胰酶就可将细胞消化单细胞。对于较难消化的细胞，可以用２%利多卡因消化５-８分钟，然后再弃去，加培养基吹打也可以，对细胞的影响不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把旧培养液吸的干净一点，直接加酶消化应该不会有什么问题。弃培养液后，用０.０４%的EDTA冲洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室温孵育５min，弃取大部分EDTA，加入与剩余EDTA等量的胰酶(预热)总体积１/１０v。消化到有细胞脱落。不过有人说EDTA对细胞不好，有证据吗？培养的BASMC：倒掉旧培养液加入少量胰酶冲一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶约６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入适量新培养基中和，并分瓶这种方法简单、省事；效果很好并且不损失细胞！
Hepatoma 22细胞系相关产品：GM03190A细胞、NCI-H1563细胞、OCILY-19细胞
Jijoye细胞系相关产品：D283细胞、SRA 01/04细胞、Mo 59J细胞
RT4细胞系相关产品：U-118-MG细胞、OLN 93细胞、SVOG细胞
细胞生长：贴壁
KMB-17 epithelioid cells人二倍体细胞系
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
最近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，１XPBS漂洗两次，加入１mlEDTA-Tripsin（１００mm皿为例），３７度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代最重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-２、A５４９、Hela、SGC-７９０１几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理５-６min，C２C１２、COS-７、NIH-３T３比较容易脱落，２min足矣，P１９Cl６和２９３细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
细胞传代方法：１：２传代
OV2008细胞系相关产品：NS1-Ag4/1细胞、HRC-99细胞、NCI-H727细胞
GM06141细胞系相关产品：RBL-I细胞、THP 1细胞、NCI N87细胞
BaF3细胞系相关产品：ECV304细胞、NCIH526细胞、H-1437细胞
HHL5细胞系相关产品：NCI-H322细胞、HTori3细胞、DOK细胞
SHI-1细胞系相关产品：T24(ECV304)细胞、C32r细胞、A 172细胞
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
KMB-17 epithelioid cells人二倍体细胞系
细胞生长特性：贴壁生长
细胞形态特性：详见细胞说明书
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：１)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加２-３ml ０.２５%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在１-２min)；２)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；３)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；４)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周２-３次)，待细胞密度达到８０%以后重复１项操作或者冻存；特别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)１)收到细胞后请尽快更换为含１５%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加１０%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过７２小时)；２)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径６cm的培养皿进行传代培养；３)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。
Liver-02细胞系相关产品：MC-4细胞、GM00637F细胞、Ca-Ski细胞
Jurkat77细胞系相关产品：HCEC细胞、P3.times.63 Ag8.653细胞、H766T细胞
HSC细胞系相关产品：MDAMB435S细胞、AC29细胞、D407 RPE细胞
HAPI细胞系相关产品：ARO细胞、H1944细胞、NCIH2227细胞
HRC-99细胞系相关产品：CW-2细胞、HA1800细胞、MO59J细胞
H-1563细胞系相关产品：NCI-H2023细胞、MIN6细胞、NCIH1568细胞
Duke University 145细胞系相关产品：M619细胞、D-283 Med细胞、Japanese Tissue Culture-39细胞
IOSE-80细胞系相关产品：mouse Inner Medullary Collecting Duct-3细胞、LO2细胞、H1781细胞
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KMB-17 epithelioid cells人二倍体细胞系
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Normal Rat, August 3, 1983细胞系相关产品：HL-60 clone15细胞、Rat 1细胞、HOK细胞
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H-2452细胞系相关产品：S-16细胞、hOMF细胞、BCaP 37细胞
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CHL1细胞系相关产品：MBMEC细胞、NCI-H220细胞、MDA157细胞
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A2780CP70细胞系相关产品：P3 NS1 Ag4/1细胞、THLE2细胞、B16 melanoma细胞
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Porcine Kidney-13细胞系相关产品：H-1048细胞、P3HRI细胞、HPAF II细胞
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