"OP9 Thawing小鼠骨髓基质细胞系
细胞背景资料:骨髓基质;C57BL/6 x C3H
细胞形态:上皮细胞样
OP9 Thawing小鼠骨髓基质细胞系
细胞生长:贴壁
细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
OP9 Thawing小鼠骨髓基质细胞系
细胞生长特性:贴壁
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱,要轻柔操作。冻存细胞要快速融化,并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感,离心去除冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml;培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。离心方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀;以大约80x离心2到3分钟;弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞,并且进行活细胞计数。细胞铺板,细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个,可以区分为200多种不同类型的细胞:形态结构,代谢,行为,功能等各不相同。追根溯源,这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以,通常把发育过程中,细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段,也发生在胎儿出生以后,乃至成人阶段。例如,人体血细胞的产生和分化,这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞,转入分化,通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞,它们的基因表达和代谢活动各不相同。
细胞形态特性:详见细胞说明书
NCTC 929细胞系相关产品:Panc02.03细胞、HPMEC细胞、S3 HeLa细胞
LA-N-5细胞系相关产品:Merwin Plasma Cell tumor-11细胞、NIH:OVCAR-8细胞、LAD-2细胞
OACP4C细胞系相关产品:B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞、EOC 20细胞、NB-4细胞
GM05887细胞系相关产品:RBL.2H3细胞、H-209细胞、ZR75_1细胞
BNL CL2细胞系相关产品:BT 20细胞、MDA2B细胞、Hs-600-T细胞
PC-3M-2B4细胞系相关产品:GBC-SD细胞、HUT125细胞、Jurkat77细胞
Huh-7.5.1细胞系相关产品:L-cells细胞、NPA87细胞、SMA-560细胞
UCLA-SO-M20细胞系相关产品:HCC-2935细胞、Henrietta Lacks cells细胞、BC-3H-1细胞
Leghorn Male Hepatoma cell line细胞系相关产品:2V6.11细胞、P-19细胞、COR-L 105细胞
SJ-Rh 30细胞系相关产品:LLC PK1细胞、H716细胞、RKN细胞
KM.12细胞系相关产品:HFLS细胞、GM02131细胞、SK HEP 01细胞
HCFB(HCF)细胞系相关产品:WEHI-231细胞、MG63细胞、OVCAR 420细胞
McA-RH7777细胞系相关产品:H-1373细胞、SUM-149细胞、SMC-1细胞
HUASMC细胞系相关产品:HC11细胞、SKLU01细胞、hTERT-HME1细胞
C2A细胞系相关产品:HaCaT细胞、P 815细胞、brain-derived Endothelial cells.3细胞
U266B1细胞系相关产品:OV433细胞、PC14细胞、HSC3细胞
BALL1细胞系相关产品:Wien 133细胞、HEH2细胞、UCLA-SO-M21细胞
Monomac-1细胞系相关产品:H2228细胞、Panc 10.05细胞、SUM190细胞
DR2R 1610细胞系相关产品:GNM细胞、DLD 1细胞、Panc2_03细胞
7860细胞系相关产品:HPAF II细胞、IMR90细胞、RS411细胞
NIH/3T3细胞系相关产品:MDAPC2B细胞、MDA-MB 468细胞、MX-1细胞
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OVCAR 432细胞系相关产品:ME16C细胞、Sarcoma OSteogenic-2细胞、HEI193细胞
HCET细胞系相关产品:NCI H295R细胞、FM88细胞、EA.hy 926细胞
SNU16细胞系相关产品:CAL39细胞、FL 62891细胞、RIN14B细胞
BHP10-3细胞系相关产品:A375-SM细胞、MES23.5细胞、SKGT2细胞
OP9 Thawing小鼠骨髓基质细胞系
MNNG/HOS Cl #5细胞系相关产品:Chinese Hamster Lung细胞、CHP-212细胞、Hs 895 T细胞
KM12细胞系相关产品:Farage Original Line细胞、NCI-H165细胞、SW-839细胞
HT 144细胞系相关产品:CNE1-LUC细胞、UMC-11细胞、PC-9细胞
130 T细胞系相关产品:H2106细胞、3396细胞、MDAMB231细胞
2PK3细胞系相关产品:NIH 3T6细胞、Lewis-Lung细胞、NTERA2D1细胞
TE-1细胞系相关产品:OC316细胞、Sf-21细胞、HCC-1395细胞
CEL细胞系相关产品:FCCH1024细胞、U266S细胞、H-2342细胞
T-98G细胞系相关产品:COLO 320DM细胞、TC7细胞、MV-522细胞
Hs895T细胞系相关产品:Roswell Park Memorial Institute 7951细胞、SK-N-AS细胞、MOLP2细胞
alpha TC1-6细胞系相关产品:Namalva细胞、H-1688细胞、NCIH2228细胞
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16HBEo-细胞系相关产品:NCIH3255细胞、MH7A细胞、aNK细胞
BEL7404细胞系相关产品:Detroit562细胞、LNCaP FGC细胞、SACC83细胞
Tu177细胞系相关产品:CMT64细胞、Mhh-Call 2细胞、HPDE细胞
NCIH1770细胞系相关产品:J45.01细胞、293 F细胞、Kasumi 1细胞
IALM细胞系相关产品:DMS273细胞、COS7细胞、C28/I2细胞
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Dunn LM8细胞系相关产品:343MG细胞、Fortner's melanotic melanoma #3细胞、BMSCs(mBMSCs)细胞
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TE 354.T细胞系相关产品:NFHIOSE-80细胞、EB-1细胞、RPMI 7951细胞
TALL-104细胞系相关产品:Mino细胞、LTEP-sm 1细胞、HEK-293-EBNA细胞
A-172细胞系相关产品:SK Mel 2细胞、HPAF-2细胞、KALS-1细胞
NRK clone 52E细胞系相关产品:PBL细胞、ARO81细胞、NIH:OVCAR-5细胞
F56 [Human neoplasm]细胞系相关产品:CL-11细胞、PANC-02-03细胞、TE-85 clone 5细胞
H-1155细胞系相关产品:143BTK-细胞、LN 229细胞、hADSCs细胞
Rh30细胞系相关产品:HT 115细胞、Ramos.G6.C10细胞、JM-Jurkat细胞
SW954细胞系相关产品:KNS81细胞、MIA-Pa-Ca-2细胞、HCC15细胞
Madin-Darby Canine Kidney细胞系相关产品:U-251细胞、CCC-HEL-1细胞、RERF-LC-MS细胞
MO59J细胞系相关产品:PIG3细胞、LICR-LON-HN6细胞、TE7细胞
OP9 Thawing小鼠骨髓基质细胞系
HCC94细胞系相关产品:HCC-2218细胞、AN-3细胞、H2227细胞
SCC90细胞系相关产品:COLO.205细胞、U-373MG ATCC细胞、W256细胞
BALB 3T3 clone A31细胞系相关产品:MG-63细胞、PL45细胞、TM-3细胞
FHs74 Int细胞系相关产品:HRC-99细胞、Med 283细胞、LO2细胞
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3T3-J2细胞系相关产品:Potorous tridactylus Kidney 1细胞、C-127细胞、VK2细胞
H-2196细胞系相关产品:HTori 3细胞、PANC3.27细胞、C1R细胞
HOS (TE85)细胞系相关产品:H4-IIE-C3细胞、HT-1080细胞、PANC-08-13细胞
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HCT FET细胞系相关产品:NBLAN5T细胞、MDCK supertube细胞、HO1-N-1细胞
HSC-2细胞系相关产品:Hs-578-T细胞、EPC细胞、MPC-11细胞
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