NFS-60细胞：G-CSF依赖性小鼠白血病细胞系

"NFS-60细胞：G-CSF依赖性小鼠白血病细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：淋巴母细胞样
细胞生长：悬浮
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：３传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞（绝大部分１min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化。２，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-３细胞），吹打不超过２０次后（一般１０次即可），成小规模聚集（１０个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法５min还不能消化），比如HCT１５, LS４１１和KM１２，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００mm dish，一次最多加入５００ul，就足够了，一般我加３００ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过５min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙状移动。
Balb/3T3-4-Cl31细胞系相关产品：PL-5细胞、Tb1.Lu细胞、CHG5细胞
OSK-1细胞系相关产品：REC-1细胞、Pro-5 Lec1.3c细胞、A-549细胞
KYSE140细胞系相关产品：H1573细胞、BJ1细胞、H1299细胞
SNU449细胞系相关产品：BNL 1MEA.7R.1细胞、NCI-H1975细胞、HUC-1细胞
L929(NCTC)细胞系相关产品：C-26细胞、GP-293细胞、AHH1细胞
B-104细胞系相关产品：COLO-320DM细胞、SaOS细胞、RMS 13细胞
TC-1[JHU-1]细胞系相关产品：OCI/AML5细胞、BEL/FU细胞、MLA 144细胞
HSC-4细胞系相关产品：RPMC细胞、COLO 679细胞、SK-N-BE细胞
NCI-446细胞系相关产品：RM1细胞、H1522细胞、Intestinal Porcine Epithelial细胞：-1细胞
H1836细胞系相关产品：H-1581细胞、MUGCHOR1细胞、GM00215A细胞
NCIH146细胞系相关产品：NCI-H64细胞、A375SM细胞、293-F细胞
RAEC细胞系相关产品：HCC2279细胞、NCIH2122细胞、HM06.A1细胞
Normal Rat Kidney-49F细胞系相关产品：A-172MG细胞、Tu177细胞、HCC-1419细胞
H-1522细胞系相关产品：KNS-42细胞、CAL-78细胞、Hs 766.T细胞
SG231细胞系相关产品：K7M2细胞、32Dc3细胞、MRMT-1细胞
LA-795细胞系相关产品：NR 8383细胞、HTori 3细胞、DHL6细胞
LA-795细胞系相关产品：NR 8383细胞、HTori 3细胞、DHL6细胞
CCC-HEH-2细胞系相关产品：SK-GT-4细胞、Tn5 B1-4细胞、MESSADX5细胞
8305-C细胞系相关产品：CDC/EU.HMEC-1细胞、TGHAVSMC细胞、MCF12F细胞
WRL68细胞系相关产品：D-283细胞、H-2107细胞、LC-2/ad细胞
NCIH2030细胞系相关产品：DoHH-2细胞、RH-30细胞、GP2-293细胞
SHP77细胞系相关产品：HS-683细胞、PFSK细胞、TE-10细胞
HCC-2185细胞系相关产品：hTERT RPE-1细胞、SU-DHL-8细胞、KYSE140细胞
SKCol1细胞系相关产品：AtT 20细胞、NCIH250细胞、OVCAR-8/ADR细胞
MDA-MB157细胞系相关产品：hUC-MSC细胞、CZ-1细胞、SUM-102细胞
H-2591细胞系相关产品：HTori-3细胞、A549细胞、CCRF CEM细胞
MDCC-MSB-1细胞系相关产品：C-33-A细胞、RDES-1细胞、NCI-H1623细胞
NeHepLxHT细胞系相关产品：SNU-C2A细胞、SLMT1细胞、SNU449细胞
MDAMB468细胞系相关产品：HT1080细胞、BC-023细胞、IM9细胞
Mink Lung细胞系相关产品：NCI-H1915细胞、HCC-44细胞、LNCaP clone FGC细胞
HRVEC细胞系相关产品：CCK-81细胞、COLO_320DM细胞、L-6细胞
HeLa 229细胞系相关产品：NTERA-2cl.D1细胞、LS 180细胞、FRTL5细胞
GRSL细胞系相关产品：Granta519细胞、DBTRG-05MG细胞、NCI-H1836细胞
H-1395细胞系相关产品：A549-Taxol细胞、NCI-322细胞、UO-31细胞
DU-145细胞系相关产品：HRGEC细胞、Human Pancreatic Duct Epithelial细胞、Hx-147细胞
DSL-6A-C1细胞系相关产品：HTh 74细胞、SW-1271细胞、HMEC细胞
IBRS-2细胞系相关产品：Lewis Lung Cancer细胞、OV2008细胞、NCIH1092细胞
870细胞系相关产品：H1650细胞、BTI-Tn5B14细胞、EFO 27细胞
CCD1112Sk细胞系相关产品：NB1RGB细胞、BL6细胞、MV-4:11细胞
FTC-133细胞系相关产品：SNU-C1细胞、SNU-251细胞、NSC34细胞
BrCL15细胞系相关产品：Hep II细胞、Cates 1B细胞、P388-D1细胞
TSUpr1细胞系相关产品：SNU761细胞、UCLA NPA871细胞、KG1细胞
PANC 203细胞系相关产品：TE4细胞、WEHI-3细胞、L-WRN细胞
Hk-2细胞系相关产品：B5537SKIN细胞、BT20细胞、PC-10细胞
H2135细胞系相关产品：HCC-1143细胞、Pa14C细胞、OCI-Ly19细胞
GM637A细胞系相关产品：HO-8910 PM细胞、686LN-M4e细胞、Hs 746.T细胞
74Int细胞系相关产品：RT-BM细胞、H-1581细胞、H6c7细胞
Hs839.T细胞系相关产品：SCC154细胞、VMM39细胞、Becker细胞
Hs 445细胞系相关产品：OP9细胞、TK.10细胞、H-1963细胞
RA.1细胞系相关产品：TT细胞、H-1092细胞、COLO 680N细胞
P3X63 AG 8.653细胞系相关产品：C33细胞、P-2003细胞、PANC-10-05细胞
CHL-11细胞系相关产品：U373 MG细胞、Chang Cells细胞、HC11 Mammary Epithelium细胞
2780CP细胞系相关产品：KOPN8细胞、TFH细胞、CHP-100细胞
A2058细胞系相关产品：SW-480细胞、AMC-HN8细胞、A7r5细胞
DF-1细胞系相关产品：H1184细胞、UPCI:SCC090细胞、NCIH727细胞
Hs746-T细胞系相关产品：DU 4475细胞、NCI-H2126细胞、KY-270细胞
H-520细胞系相关产品：QGP-1细胞、UPCI-SCC090细胞、CPAE细胞
MLFC细胞系相关产品：Murine Carcinoma-38细胞、Karpas422细胞、MM1细胞
MAVER1细胞系相关产品：SNU-761细胞、HuNS1细胞、FF-WT-BJ细胞
2008细胞系相关产品：T241细胞、1301细胞、SK-Col-1细胞
Tb 1 Lu细胞系相关产品：MCF.10A细胞、BEL 7402细胞、NHRF细胞
RH-35细胞系相关产品：H-2452细胞、Psi2-DAP细胞、H498细胞
GA10细胞系相关产品：H-322细胞、HCT116/L细胞、TK+/- (clone 3.7.2C)细胞
PGBE1细胞系相关产品：Simpson细胞、Clone 15 HL-60细胞、C6661细胞
BHP 10-3细胞系相关产品：W133细胞、Jurkat clone A3细胞、RPMI 1788细胞
BL1339细胞系相关产品：L363细胞、OVISE细胞、H-358细胞
Ramos G6.C10细胞系相关产品：SW-579细胞、T-ALL-1细胞、MDA-MB-175VII细胞
MCA38细胞系相关产品：U-hth74细胞、DMS 273细胞、P3/NSI/1-AG4-1细胞
BPH-1细胞系相关产品：H711细胞、HEK;293细胞、Hs-746T细胞
SW.620细胞系相关产品：GM-215细胞、MCCAR细胞、SK-NMC细胞
H-196细胞系相关产品：HCC941122细胞、Normal Rat Kidney-49F细胞、GP2d细胞
D283MED细胞系相关产品：Lu99A细胞、ASH-3细胞、PC 61.5.3细胞
KYSE0520细胞系相关产品：Caki-1细胞、HEL-1细胞、Hs281T细胞
RBL.2H3细胞系相关产品：SCC 4细胞、AD293细胞、RT4P细胞
"