KBM-5:人慢性髓白血病复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：悬浮

可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态HAO与不HAO至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺HAO的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更HAO一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

LI7细胞类似产品：：BxPC-3细胞、3T3 J2细胞、T173细胞

H-1930细胞类似产品：：PaCa2细胞、HS-294-T细胞、253J-BV细胞

RPMI1846细胞类似产品：：KYSE50细胞、RSC-96细胞、HASMC细胞

PANC-03-27细胞类似产品：：hTERT-HME-1细胞、G 401细胞、HEK.EBNA细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：慢性髓白血病；女性

KBM-5:人慢性髓白血病复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

细胞形态：淋巴母细胞样

GM07404D细胞类似产品：：H1838细胞、NS20Y细胞、KP2细胞

Lu-65细胞类似产品：：LO2细胞、NCIH661细胞、MDAMB175细胞

H-2227细胞类似产品：：HT1197细胞、HUT 125细胞、J.E6-1细胞

培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制HAO的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋HAO冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做HAO标记；６)冻存：在殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

KBM-5:人慢性髓白血病复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

细胞生长特性：悬浮

细胞培养中常用设施及设备：实验室设计：细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。常用设施及设备：1)超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。2)无菌操作间：一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒HAO的无菌物品等。3)操作间：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物。4)洗刷消毒间：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。5)分析室：显微镜、计算机及打印机等。

AZ-521细胞类似产品：：MADISON LUNG TA-109细胞、MOLT.4细胞、T98-G细胞

L6565细胞类似产品：：GM00637F细胞、MB157细胞、DU145细胞

DMS 153细胞类似产品：：Hs852T细胞、CHO细胞、T/G HA VSMC细胞

DV90细胞类似产品：：SRA01/04 (HLE)细胞、RenCa细胞、373 MG细胞

H-1618细胞类似产品：：PCI:SG-231细胞、JROECL 33细胞、BC-019细胞

H-292细胞类似产品：：WEHI164细胞、PC3M细胞、NCI-H-128细胞

Tca-8113细胞类似产品：：KM12细胞、Hca-F细胞、NP-69细胞

Henrietta Lacks cells细胞类似产品：：IM 9细胞、OVHM细胞、MOLT16细胞

K562细胞类似产品：：SUM52细胞、LWnt-3A细胞、EO771细胞

C1498细胞类似产品：：EB-3细胞、BJA-B1细胞、Mono Mac 1细胞

J-111细胞类似产品：：Vero 76 clone E6细胞、LAD2细胞、HT-22细胞

CD18/HPAF细胞类似产品：：NB-9细胞、RL95-2细胞、Chinese Hamster Lung细胞

IGROV 1细胞类似产品：：HDF-a细胞、NCI-Hut 125细胞、OLN-93细胞

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GC9811-P细胞类似产品：：Anip973细胞、HNE-3细胞、BE2_C细胞

RKO细胞类似产品：：WM451Lu细胞、SKML-28细胞、HSC（Human Schwann）细胞

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NCIH1650细胞类似产品：：MUTZ1细胞、Anip973细胞、32Dc3细胞

STO细胞类似产品：：NCIH1092细胞、WEHI3B细胞、H-146细胞

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CCD-19Lu细胞类似产品：：HTh74细胞、Pt K1 (NBL-3)细胞、H358细胞

MDCK.2细胞类似产品：：Michigan Cancer Foundation-10A细胞、Shadyside Hospital Pittsburgh-77细胞、Hep G2-Luc细胞

KBM-5:人慢性髓白血病复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

NU-GC-4细胞类似产品：：TK-1细胞、Ramos G6.C10细胞、BERH-2细胞

Epstein-Barr-1细胞类似产品：：HIT T-15细胞、HCC1359细胞、MDCC-MSB-1细胞

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Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2细胞类似产品：：NFHIOSE-29细胞、LICR-HN-6细胞、OCILY3细胞

DMS 153细胞类似产品：：Hs852T细胞、3T3-Swiss细胞、GA-10 clone 4细胞

NRK clone 49F细胞类似产品：：H322T细胞、OVCA-420细胞、OE21细胞

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MDAMB175细胞类似产品：：FCCH1018细胞、Reuber H-35细胞、H292细胞

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KBM-5:人慢性髓白血病复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

RCC-JF细胞类似产品：：HUVEC-C[HUVEC]细胞、T47D细胞、EFM19细胞

KNS81细胞类似产品：：3T3-J2细胞、LS-513细胞、LUDLU 1细胞

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NCI H226细胞类似产品：：Human Microvascular Endothelial Cell line-1细胞、HCC78细胞、BAR-T细胞

Hs746T细胞类似产品：：CEMC1细胞、TE-6细胞、U-87细胞

TPC-1细胞类似产品：：OUMS23细胞、D407 RPE细胞、RTE细胞

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