TYK-nu Cells(赠送Str鉴定报告)|人卵巢癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，HAO象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中Zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，GAO倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良HAO，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提GAO细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

细胞生长：贴壁

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TYK-nu Cells(赠送Str鉴定报告)|人卵巢癌细胞

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不HAO、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不HAO》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，ZuiHAO经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。

细胞传代方法：１：２传代

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HEK293A细胞类似产品：：NK62a细胞、Panc 4.03细胞、L-540细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

AML-EOL-1细胞类似产品：：HSAS1细胞、FAK+/+细胞、NCI-H2009细胞

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BCaP 37细胞类似产品：：LA-N-1细胞、PC615.3细胞、AG06814-N细胞

造成实验室细胞污染常见情况总结：细胞培养中Zui常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染，大多数较难处理。那么，哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢？我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】１)为节省时间，有人已经用超净台四个多小时，不开紫外灭菌３０min,酒精擦拭后直接开始试验；２)器材或者溶液很久没用，未检测是否污染而直接使用；离心管多次使用，枪头为了方便交叉使用；３)超净台不点酒精灯；点了酒精灯放在右上角，而你在左下角做试验；４)不带手套，徒手操作；５)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具，如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需１２１°CGAO压灭菌２０分钟后３７％烤干备用)。超净台和桌面，东西太多太乱：超净台不是储物箱，什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台！这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面，切忌东西堆积如山，不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞！一不小心“飘”进你的细胞培养板里，细胞就会养的不HAO，啥时候死了都不知道！【培养箱太久没清洁】细胞污染了，并非直接扔了培养皿就不管了，首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染，如果有而且HAO几个板子都有类似的污染块，那很可能是培养箱中的水或者空气污染了，得给培养箱做个大扫除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水没了要记得加，还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂，难管理】在传代细胞这种卫生要求GAO，人多了，不确定因素多了，难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室，实验服当风衣穿，不扣纽扣，不戴，就容易造成细胞污染；超净台做实验时，喜欢说话聊着做试验，要是还不带口罩，里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢！

贴壁消化难题：１，先用PBS 把细胞洗两遍，使瓶内没有血清了，减少对胰酶的中和，然后用新配的０.２５%的胰酶加入３ml左右，放在３７度，然后可以在细胞有些消化下来时，拿着瓶口，运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体，这样细胞很快就下来了，还不需要吹打，分散也均匀；２，成团、絮状：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强，用０.５%胰酶(含０.１%EDTA)一般要消化１２~１５min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性Zui强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势)，随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶)，加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片)；消化过度：马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中８００RPM ３分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养，状态不HAO的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉！

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