HuH-1 Cells(赠送Str鉴定报告)|人肝癌细胞

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细胞背景资料：详见相关文献介绍

细胞形态：上皮细胞样

解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够GAO，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的Zui佳条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Zui近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

细胞生长：贴壁

Tu-686细胞类似产品：：HEK-AD 293细胞、Tohoku Hospital Pediatrics-1细胞、ROS 17/2.8细胞

NCIH2452细胞类似产品：：B-3细胞、NMCG1细胞、HPMEC细胞

RCK8细胞类似产品：：HCC-1954BL细胞、NCI H929细胞、C3H 10T1/2细胞

ONS-76细胞类似产品：：3D4/21细胞、SC细胞、KRC Y细胞

SCCVII细胞类似产品：：U-373MG ATCC细胞、Vx-2细胞、SiHa细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

预防细胞污染的注意事项：实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖。CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

CAL 12T细胞类似产品：：HOS-TE85细胞、SW-1990细胞、MES-SA/Dx-5细胞

M-1 myeloid leukemia细胞类似产品：：NCI H69细胞、H69/P细胞、RAT2细胞

hTERT-RPE1细胞类似产品：：Hs821T细胞、STTG1细胞、DR2R 1610细胞

GM03671细胞类似产品：：TE-3A细胞、NCI-H295R细胞、E304细胞

LWnt-3A细胞类似产品：：A549 ATCC细胞、Epstein-Barr-3细胞、DMS 114细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分

CNE细胞类似产品：：JB6Cl30细胞、SP-2细胞、MC26细胞

CT26.WT细胞类似产品：：NCIH1341细胞、SCC-25细胞、SN-12C细胞

H4-IIE-C3细胞类似产品：：CAL 27细胞、Human Embryonic Kidney 293细胞、Walker-Ca.256细胞

ChaGo-K1细胞类似产品：：U-118 MG细胞、MDA-330细胞、alpha TC1.6细胞

N-2a细胞类似产品：：SUDHL16细胞、B16-BL6细胞、NCI.H226细胞

SW1990细胞类似产品：：SNU1040细胞、CACO2细胞、C-4I细胞

常见细胞培养中一些问题总结：１)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为５%-１５%，不要低于５%或GAO过２０%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过GAO则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为１０%，可以适量加减；２)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；３)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；４)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；５)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；６)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。

贴壁消化难题：１，先用PBS 把细胞洗两遍，使瓶内没有血清了，减少对胰酶的中和，然后用新配的０.２５%的胰酶加入３ml左右，放在３７度，然后可以在细胞有些消化下来时，拿着瓶口，运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体，这样细胞很快就下来了，还不需要吹打，分散也均匀；２，成团、絮状：消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强，用０.５%胰酶(含０.１%EDTA)一般要消化１２~１５min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性Zui强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势)，随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶)，加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片)；消化过度：马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中８００RPM ３分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养，状态不HAO的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉！

MC3T3细胞类似产品：：P3-NS1/1-Ag4-1细胞、Panc 02细胞、COLO 201细胞

Neukoplast细胞类似产品：：HKF细胞、Laboratory of Allergic Diseases 2细胞、TOV21G细胞

OVCAR 432细胞类似产品：：ME16C细胞、Sarcoma OSteogenic-2细胞、HEI193细胞

H.Ep. #2细胞类似产品：：H1792细胞、Hs 739.T细胞、COV-362细胞

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SGC-7901细胞类似产品：：NCIH596细胞、NK-92细胞、V-79-4细胞

NCI-H-82细胞类似产品：：BMDC细胞、HOS-TE85细胞、M619细胞

Japanese Tissue Culture-28细胞类似产品：：HuH-28细胞、Pa18C细胞、Molm14细胞

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MRC9细胞类似产品：：HLEB-3细胞、NCI-H226细胞、NCIH510细胞

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Kobe university Oral Squamous Cell culture-2细胞类似产品：：SHEE细胞、NCI-H660细胞、NS-1-Ag4-1细胞

Walker-Ca.256细胞类似产品：：Tu 177细胞、WSU-DLCL(2)细胞、KNS42细胞

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CD-18细胞类似产品：：B16 melanoma F10细胞、NCIH1573细胞、RAEC细胞

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P3/NSI/1-AG4-1细胞类似产品：：SW 1088细胞、Alexander细胞、CAL-148细胞

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OsACL细胞类似产品：：Instituto Biologico-Rim Suino-2细胞、LU65细胞、SUM-159-PT细胞

EoL-1 cell细胞类似产品：：Hs746-T细胞、NGP细胞、143BTK-细胞

CHL-1细胞类似产品：：NCI-128细胞、HEK/EBNA细胞、MGH-U1细胞

C42细胞类似产品：：LUDLU-1细胞、1E8-H细胞、PLA 802细胞

MHCCLM3细胞类似产品：：HCC0095细胞、H2110细胞、SNU-719细胞

H2170细胞类似产品：：MBdSMC细胞、IM95细胞、MADB 106细胞

NCI-H1666细胞类似产品：：Mouse Bladder Tumor line-2细胞、MDA-MB-435 S细胞、GM02131细胞

TK10细胞类似产品：：KY70细胞、SK HEP-1细胞、NCI-H1651细胞

U-87-MG细胞类似产品：：MFHL-2细胞、A375细胞、T98 G细胞

NCIH1355细胞类似产品：：HMSC细胞、D341细胞、T. T细胞

Tu 212细胞类似产品：：H-187细胞、SHI1细胞、AGS细胞

KMS11细胞类似产品：：B 95-8细胞、SUM159细胞、MLA 144细胞

OVCAR 432细胞类似产品：：ME16C细胞、Tb 1 Lu细胞、SUM-149细胞

BMU-S1细胞类似产品：：H-2052细胞、CCRF.CEM细胞、NCI-H1155细胞

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