百脉根苷的含量测定

2020/10/24 7:56:57

背景及概述[1]

红景天为景天科红景天属(RhodiolaL.)多年生草本或亚灌木植物的统称,民间多以其匍匐的根状茎作为药用。早在1200年前的藏医《四部医典》中已将其作为“神药”,1596年李时珍《本草纲目》中记有“景天、上品、甘涩、寒、无毒、治肺疾”。红景天是中药“适应原样作用”研究最具代表性的品目,依据植物形态特征差异,GBIF2010(全球生物多样性信息网)统计,红景天属植物全世界共有136个种,我国73种,2个亚种和7个变种。

红景天属植物进行过化学成份研究的种有47个,从中分离出了近300种化合物,人们基于8种化学成分:红景天苷、络塞维、rosarin、rosavin、酪醇、儿茶酸、草质素苷和没食子酸的差异性建立了化学分类系统,其中红景天苷和没食子酸是红景天种的共有成分。研究发现红景天根中所含百脉根苷(lotaustralin)成分在生药粉碎和饮料加工过程中会被生氰糖苷水解酶linamarase分解,产生毒理成分氢腈酸,是红景天提取物临床应用过程中产生收敛作用和便秘的主要原因。

含量降低方法[1]

红景天提取中百脉根苷的降低方法,其步骤如下:

a、将红景天根风干后粉碎,过45~60目筛,得到红景天根粉末,称重,装入超临界萃取釜中;

b、在超临界萃取釜中萃取,萃取温度为30~50℃,CO2流体压力为20~40MPa,夹带剂流速0.2~0.5ml/min,萃取时间1~3h,萃取物用甲醇吸收为吸收液,所述甲醇与红景天根粉末的体积质量比为50ml:100g,所述夹带剂由乙醇、石油醚、水按照质量比5:1:4配置而成;该夹带剂可将药材中红景天苷、络塞维等活性成分提出,而百脉根苷提出量极低;

c、吸收液用D101型大孔树脂层析,每小时两个柱床体积流速的蒸馏水洗脱至流出液无色,再用10个柱床体积的质量百分浓度80%乙醇洗柱子,乙醇洗脱液在450~500Pa条件下减压浓缩至近干,105℃干燥24h,得到浅红色红景天提取物。

含量测定[2]

一种亚麻籽中亚麻苦苷和百脉根苷的测定方法,具体包括如下步骤:

(1)标准曲线的制作:准确称量亚麻苦苷和百脉根苷标准品,用50%乙腈-50%水分别配制成浓度为100μg/mL的标准溶液,分别取1、2、3、4、5mL用50%乙腈-50%水定容至50mL,配制成浓度为2、4、6、8、10μg/mL的标准品系列溶液,分别进样10μL进行高效液相分析,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得到亚麻苦苷和百脉根苷的标准曲线方程。液相分析条件为:AtlantisC色谱柱;流动相:乙腈-水(85:15,V/V);流速1mL/min,柱温30℃,进样量5μL。采用蒸发光检测器(ELSD),气体流速2L/min,漂移管温度85℃,增益值为2。

(2)样品的前处理:

①亚麻籽油样品处理:取1mL亚麻子油加2mL50%乙腈-50%水溶液超声提取10min(温度为50℃、超声功率250W)后再振摇1min,如此反复3次,静置分层,取上清液过0.45微米滤膜后,得样品溶液做液相分析。

②亚麻籽粉样品处理:取200mg固体样品加2mL50%乙腈-50%水溶液超声提取10min(温度为50℃、超声功率250W)后振摇1min,如此反复3次,然后10000rmp离心2.5min,取上清液过0.45微米滤膜后,得样品溶液做液相分析。

③亚麻籽粕的处理:亚麻籽粕碾碎成粉后取500mg样品加入5mL50%乙腈-50%水溶液超声提取10min(温度为50℃、超声功率250W)后振摇1min,如此反复3次,然后10000rmp离心2.5min,取上清液过0.45微米滤膜后,得样品溶液做液相分析。

(3)样品测定:步骤(2)所得到的样品溶液进行液相分析,液相分析条件为:AtlantisC色谱柱;流动相:乙腈-水(85:15,V/V);流速1mL/min,柱温30℃,进样量5μL。采用蒸发光检测器(ELSD),气体流速2L/min,漂移管温度85℃,增益值为2。

(4)亚麻苦苷和百脉根苷含量的计算:对步骤(3)得到的样品图谱进行定位和积分,得到峰面积,由步骤(1)得到的标准曲线计算出样品中亚麻苦苷和百脉根苷的浓度,从而得到对应亚麻籽产品中亚麻苦苷和百脉根苷的含量。

主要参考资料

[1]CN201811561472.9红景天提取中百脉根苷的降低方法

[2]CN201810837039.7一种亚麻籽产品中抗营养因子亚麻苦苷和百脉根苷的检测方法

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