基因调取的方法及应用

2019/12/31 11:42:56

概述

基因调取是以组织cDNA文库或者细胞cDNA文库为模板,根据目的基因信息,特异性地设计基因引物扩增cDNA。亦可将基因片段或者是功能元件亚克隆至不同的工具载体,以满足不同的科研需求。

基因调取常用方法[1]

RACE法调取基因

步骤

简并引物

总RNA的提取和检测

RT—PCR扩增出cDNA片段

cDNA3’、5’RACE法全长扩增

引物设计、OuterPCR反应、InnerPCR反应、产物回收及测序。

应用[1]

真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取,根据人参皂件精卧酶的N端氩基酸序列蹬计简井引物.以R1、-PCR得到eDNA片段,采甩3’与5’端的特异性引物,“以菌种总RNA为模板进行扩增.得到cDNA3’及5’末端的基因序列.进而得到目的基因的CDS区全序列。将得到的序列翻译成氨基酸.经计算可知由其编码的蛋白质分子质量约为70.4ku,与前期实验纯化出的人参皂苷精苷酶的分子质醋71ku基本一致,“r以认定所得目的基因的CDS医全序列是正确的。

主要参考资料

[1] 杜枫,金凤燮,鱼红闪。真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取。大连工业大学学报,第30卷第2期。

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