背景[1-3]
小鼠Β氨基己糖苷酶A(Β-HEX A)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)水平。用纯化的小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)，再与HRP标记的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的浓度。
注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。
应用[4][5]
用于Sandhoff病的临床诊断和分子机制研究
Sandhoff病是一种罕见的常染色体隐性遗传溶酶体贮积病,是由于氨基己糖苷酶β-亚单位基因(HEXB,OMIM 606873)突变导致氨基己糖苷酶A(Hexosaminidase A,Hex A)和氨基己糖苷酶B(Hexosaminidase,Hex B)均缺乏,GM2神经节苷脂沉积在中枢神经系统及体细胞的溶酶体内,从而引起一系列临床表现。利用底物-荧光检测技术,测定外周血白细胞Hex A,Hex A&B酶活性;从外周血白细胞中提取患者及其父母的基因组DNA,利用PCR和基因测序技术检测HEXB基因;针对基因分析结果进行家系分析;对新突变进行12个不同物种间氨基酸序列同源性分析,并使用软件进行致病性预测分析;以正常Hexβ亚单位的蛋白质晶体结构为基础,应用生物大分子结构模拟软件对突变位点进行三维结构分析,预测氨基酸的改变对酶蛋白功能的潜在影响。结果1.所有患者均呈现进行性神经系统发育倒退症状,白细胞Hex A和Hex A&B酶活性显著降低。2.HEXB基因突变分析一共发现了7种突变,包含3种已知突(IVS12-26G>A、p.Ile207Val、p.Thr209Ile)和4种新突变(p.Leu223Pro、p.Tyr463X、p.Pro468Profs X62、p.Gly549Arg),同时在启动子区检测到2种突变(c.-122del C和c.-126C>T)可能与致病相关。
参考文献
[1]Maternal Uniparental Isodisomy Causing Autosomal Recessive GM1 Gangliosidosis:A Clinical Report[J].Jessica E.King,Amy Dexter,Inder Gadi,Val Zvereff,Meaghan Martin,Miriam Bloom,Adeline Vanderver,Amy Pizzino,Johanna L.Schmidt.Journal of Genetic Counseling.2014(5)
[2]Paternal isodisomy of chromosome 5 in a patient with recessive multiple epiphyseal dysplasia[J].Mónica Martínez García,Camilo Velez,María Fenollar‐Cortés,Ana Bustamante,Isabel Lorda‐Sanchez,Leandro Soriano‐Guillén,María‐JoséTrujillo‐Tiebas.Am.J.Med.Genet..2014(4)
[3]Incidence and carrier frequency of Sandhoff disease in Saskatchewan determined using a novel substrate with detection by tandem mass spectrometry and molecular genetic analysis[J].Braden Fitterer,Patricia Hall,Nick Antonishyn,Rajagopal Desikan,Michael Gelb,Denis Lehotay.Molecular Genetics and Metabolism.2014(3)
[4]Characterization of seven novel mutations on the HEXB gene in French Sandhoff patients[J].Pauline Gaignard,Jér?me Fagart,Natalia Niemir,Jean-Philippe Puech,Emilie Azouguene,Jeanne Dussau,Catherine Caillaud.Gene.2013(2)
[5]张文.Sandhoff病的临床诊断和分子机制研究[D].暨南大学,2017.