人瘦素受体酶联免疫试剂盒的应用

2020/6/4 14:46:11

背景[1-3]

人瘦素受体酶联免疫试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人瘦素(leptin)受体蛋白水平。用纯化的人瘦素(leptin)受体蛋白抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入瘦素(leptin)受体蛋白,再与HRP标记的瘦素(leptin)受体蛋白抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素(leptin)受体蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人瘦素(leptin)受体蛋白浓度。

人瘦素主要由白色脂肪组织产生。其前体由167个氨基酸残基组成,N末端有21个氨基酸残基信号肽,该前体的信号肽在血液中被切掉而成为146氨基酸,分子量为16KD,形成Leptin。Leptin具有广泛的生物学效应,其中较重要的是作用于下丘脑的代谢调节中枢,发挥抑制食欲,减少能量摄取,增加能量消耗,抑制脂肪合成的作用。

瘦素透过抑制体内神经肽Y neuropeptide Y(NPY)刺鼠肽基因相关蛋白agouti-related peptide(AgRP)的活跃程度,从而使体内另一种荷尔蒙黑色素细胞刺激激素alpha-melanocortin stimulating hormone(α-MSH)的活跃情度增强。瘦素不仅由脂肪组织分泌,其它组织如乳腺上皮细胞、胎盘、胃黏膜上皮细胞也中可检测到,其受体不仅存在于丘脑、脂肪组织,还广泛存在于全身各个组织。瘦素与机体系统的病理生理关系正逐步被人们了解。

应用[4][5]

用于人胎胃和小肠组织形态及瘦素和瘦素受体表达的发育研究

研究瘦素(Leptin,Lep)和瘦素受体(Leptin receptor,Lep-R)在胎儿胃和小肠中的表达。

方法:HE染色;Grimelius银染;免疫组织化学SABC法。

结果:在14W胎儿胃,可见单层柱状上皮组成的胃小凹和短小的胃腺,可见壁细胞,粘膜层出现薄层粘膜肌。20W,出现主细胞,胃壁及胃腺进一步发育完善。胎儿小肠组织的分化是从头端向尾端进行。14W,十二指肠为较发达的叶状绒毛,空肠为较明显的指状绒毛,而回肠绒毛则呈低矮的锥体形突起。20W,在十二指肠可见明显的十二指肠腺。十二指肠和空肠在20W均出现薄层粘膜肌,而回肠在24W时才可见粘膜肌,至此小肠壁四层结构才分界清楚。

Grimelius银染结果;在14W胎儿胃上皮及胃腺中可见形态不规则的内分泌细胞,随胎龄增长,内分泌细胞的数量先增多,20~23W达高峰,以胃腺底部多见,而后有所减少。

14W胎儿胃腺中即有Leptin及Lep-R表达。经与HE染色的邻片对比观察,胃腺中呈Leptin及Lep-R免疫反应阳性的细胞主要是壁细胞。20W后,随着胃腺发育,呈Leptin及Lep-R免疫反应阳性细胞数量明显增多。

十二指肠、空肠和回肠在14W时,绒毛上皮细胞均呈Leptin及Lep-R免疫反应阳性。随胎龄增加,十二指肠Leptin及Lep-R均反应强度减弱,30W后,十二指肠上皮则呈Leptin及Lep-R免疫反应阴性。空肠只有Leptin反应强度略有减弱,回肠两者反应强度均无明显变化。

参考文献

[1]Relation between plasma leptin concentration and body fat,gender,diet,age,and metaboliccovaria tes.Ostlund RE,Yang JN,Klein S,et al.The Journal of Clinical Endocrinology.1996

[2]Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.Zhang Y,Proeca R,Maffei M,et al.Nature.1994

[3]Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.Zhang Y,Proeca R,Maffei M,et al.Nature.1994

[4]Expression of leptin and B3-adrenrgic receptors in rat adipose tissure in altered thyroid states.Fain JN,Coronel EC,Beauchamp MJ,et al.Biochemical Journal.1997

[5]彭彦霄.人胎胃和小肠组织形态及瘦素和瘦素受体表达的发育研究[D].安徽医科大学,2004.

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