人黑色素瘤细胞的应用

2020/6/18 11:11:08

人黑色素瘤细胞系介绍 [1]

细胞株名称:A875 ,人黑色素瘤细胞

种属:人

组织来源:皮肤

病理诊断:恶性黑色素瘤

生长特性:贴壁生长

形态特征:上皮细胞样

细胞描述:NGF受体阳性

微生物,支原体检测:阴性

安全性:所有肿瘤细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。

培养条件[1]

完全培养基:90% DMEM(含2mM L-glutamine),10%胎牛血清

培养条件:37℃,CO2:5%

传代方法:

收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。

如果细胞已长满(达80-90%),即可进行传代培养。具体步骤如下:

1. 弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的次传代一般是一传三。

冻存方法:

冻存液:90%完全培养液,10%DMSO。现用现配

储存:液氮储存

主要参考文献

[1] 刘浩  蒋琛琛  程秀  方琳  陈超  张旭东  蒋志文;白藜芦醇对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。《中国药理学通报》 2011年07期  

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