人黑色素瘤细胞系介绍 [1]
细胞株名称:A875 ,人黑色素瘤细胞
种属:人
组织来源:皮肤
病理诊断:恶性黑色素瘤
生长特性:贴壁生长
形态特征:上皮细胞样
细胞描述:NGF受体阳性
微生物,支原体检测:阴性
安全性:所有肿瘤细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。
培养条件[1]
完全培养基:90% DMEM(含2mM L-glutamine),10%胎牛血清
培养条件:37℃,CO2:5%
传代方法:
收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:
如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。
如果细胞已长满(达80-90%),即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的次传代一般是一传三。
冻存方法:
冻存液:90%完全培养液,10%DMSO。现用现配
储存:液氮储存
主要参考文献
[1] 刘浩 蒋琛琛 程秀 方琳 陈超 张旭东 蒋志文;白藜芦醇对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。《中国药理学通报》 2011年07期