背景[1-3]
人基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA KIT采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用人基质金属蛋白酶7(MMP-7)单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的ANGPTL3与单抗结合，加入生物素化的人基质金属蛋白酶7(MMP-7)，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，ANGPTL3浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中ANGPTL3浓度。ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。
基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase），基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子而得名。其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成:（1）疏水信号肽序列;（2）前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。
应用[4][5]
人基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA KIT用于基质金属蛋白酶7和13在人椎间盘不同结构中的表达情况与椎间盘退变程度关系的研究。
细胞外基质(extra cell matrix,ECM)成分的变化可能是直接导致椎间盘退变的一个重要原因,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)在椎间盘退变的启动和调节生物学机制中发挥着重要作用,同时MMPs相关基因的研究也使人们对椎间盘突出的病因有了更深入的认识。MMPs是参与降解全身各种组织ECM的蛋白酶家族,目前椎间盘ECM中相关研究较多的MMPs包括MMP-1、2、3、7、9、13等。MMP-7又称基质溶解素,是MMPs家族中最小的独立分子,也是一个比较重要的成员,MMP-7在细胞外基质和基膜降解中起重要作用。MMP-13来源于软骨细胞,主要降解Ⅱ型胶原,还能降解聚集蛋白聚糖(aggrecan),从而在基质降解过程中发挥双重作用。MMP-13可以受到体内多种细胞因子的调节,包括MMP-2、MMP-3等其它MMPs可以提高MMP-13的活性。作为降解ECM的重要成分,MMPs在椎间盘退变中发挥的作用等相关研究显得非常重要。作为椎间盘重要营养途径结构的软骨终板的改变及MMPs的表达等研究也显得非常必要。通过研究不同程度退变椎间盘中MMP-7和MMP-13在软骨终板、髓核、纤维环不同结构中的表达与分布,了解椎间盘不同结构细胞、ECM在其退变过程中发挥的作用,探讨MMP-7和MMP-13在颈腰椎间盘退变中发挥的作用。
参考文献
[1]Aging and osteoarthritis:the role of chondrocyte senescence and aging changes in the cartilage matrix[J].R.F.Loeser.Osteoarthritis and Cartilage.2009(8)
[2]A Functional Polymorphism in THBS2 that Affects Alternative Splicing and MMP Binding Is Associated with Lumbar-Disc Herniation[J].Yuichiro Hirose,Kazuhiro Chiba,Tatsuki Karasugi,Masahiro Nakajima,Yoshiharu Kawaguchi,Yasuo Mikami,Tatsuya Furuichi,Futoshi Mio,Atsushi Miyake,Takeshi Miyamoto,Kouichi Ozaki,Atsushi Takahashi,Hiroshi Mizuta,Toshikazu Kubo,Tomoatsu Kimura,Toshihiro Tanaka,Yoshiaki Toyama,Shiro Ikegawa.The American Journal of Human Genetics.2008(5)
[3]Matrix metalloproteinases MMP2 and MMP9 are upregulated by noradrenaline in the mouse neuroendocrine hypothalamus[J].N.Maolood,H.Hardin‐Pouzet,V.Grange‐Messent.European Journal of Neuroscience.2008(5)
[4]Enhanced expression of interleukin-6,matrix metalloproteinase-13,and receptor activator of NF-κB ligand in cells derived from osteoarthritic subchondral bone[J].Kei Sakao,Kenji A.Takahashi,Osam Mazda,Yuji Arai,Hitoshi Tonomura,Atsuo Inoue,Masazumi Saito,Mikihiro Fujioka,Hisatake Takamiya,Jiro Imanishi,Toshikazu Kubo.Journal of Orthopaedic Science.2008(3)
[5]沈昌焕.基质金属蛋白酶7和13在人椎间盘不同结构中的表达情况与椎间盘退变程度关系的研究[D].重庆医科大学,2010.