背景[1-3]
氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体是可以特异性结合氨基糖苷类磷酸结构域蛋白的一类多克隆抗体，主要用于检测氨基糖苷类磷酸结构域蛋白的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理：双抗体夹心法测定标本中氨基糖苷类磷酸结构域蛋白水平。用纯化的氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氨基糖苷类磷酸结构域蛋白，再与HRP标记的氨基糖苷类磷酸结构域蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的氨基糖苷类磷酸结构域蛋白呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中氨基糖苷类磷酸结构域蛋白浓度。
氨基糖苷类抗生素（Aminoglycosides）是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素。氨基糖苷类抗生素是抑制蛋白质合成、为静止期杀菌性抗生素。其以抗需氧革兰阴性杆菌、假单胞菌属、结核菌属和葡萄菌属为特点，由于氨基糖苷类抗生素在发挥抗菌作用时必须有氧参加，所以对厌氧菌无效。
氨基糖苷类抗生素是由氨基糖（单糖或双塘）与氨基醇形成的苷。由于含有氨基和其他碱性基团，这类抗生素都呈碱性，通常在临床都被制成结晶性硫酸盐或盐酸盐。此类抗生素含多个羟基，为极性化合物，水溶性较高，脂溶性较低，口服给药时吸收不足10%，须注射给药。其水溶液在pH2～11范围内都很稳定。由于分子中糖部分存在若干个手性碳，故具有旋光性，且此类抗生素与血清蛋白结合率低，绝大多数在体内不代谢失活，以原药形式经肾小球滤过排出，对肾脏产生毒性。
应用[4][5]
用于新氨基糖苷类抗生素威替米星的药效学研究及其对重组氨基糖苷类双功能修饰酶的稳定性研究
细菌对氨基糖苷类抗生素耐药的主要方式是产生氨基糖苷类修饰酶，对药物分子中保持抗菌活性所必须的基团进行修饰，使其与作用靶位核糖体的亲和力大为降低。在革兰氏阳性菌中最常见的修饰酶为氨基糖苷类双功能修饰酶AAC（6′）-APH（2″），该酶同时具有N端的乙酰基转移酶活性和C端的磷酸转移酶活性，可修饰几乎所有种类的氨基糖苷类抗生素，使其与青霉素等作用于细胞壁的抗生素的协同作用消失。
通过在大肠杆菌中重组表达氨基糖苷类双功能修饰酶AAC（6′）、APH（2″）和AAC（6′）-APH（2″），制备酶提取物，构建重组氨基糖苷类双功能修饰酶体外代谢模型，研究了威替米星对氨基糖苷类双功能修饰酶的乙酰基转移酶活性和磷酸转移酶活性的稳定性，并且通过比较AAC（6′）-APH（2″）与AAC（6′）、APH（2″）对抗生素修饰作用的差异初步研究了基因融合对酶修饰活性的影响。
参考文献
[1]Broad-Spectrum Peptide Inhibitors of Aminoglycoside Antibiotic Resistance Enzymes[J].David D.Boehr,Kari-ann Draker,Kalinka Koteva,Manjeet Bains,Robert E.Hancock,Gerard D.Wright.Chemistry&Biology.2003(2)
[2]Aminoglycosides Modified by Resistance Enzymes Display Diminished Binding to the Bacterial Ribosomal Aminoacyl-tRNA Site[J].Beatriz Llano-Sotelo,Eduardo F.Azucena,Lakshmi P.Kotra,Shahriar Mobashery,Christine S.Chow.Chemistry&Biology.2002(4)
[3]Aminoglycoside-modifying enzymes:mechanisms of catalytic processes and inhibition[J].Eduardo Azucena,Shahriar Mobashery.Drug Resistance Updates.2001(2)
[4]Active site labeling of the gentamicin resistance enzyme AAC(6′)-APH(2″)by the lipid kinase inhibitor wortmannin[J].David D.Boehr,William S.Lane,Gerard D.Wright.Chemistry&Biology.2001(8)
[5]李聪然.新氨基糖苷类抗生素威替米星的药效学研究及其对重组氨基糖苷类双功能修饰酶的稳定性[D].中国协和医科大学,2006.