背景[1-3]
组蛋白H3.3抗体是一类可以特异性结合组蛋白H3.3的多克隆抗体，主要用于检测组蛋白H3.3的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。
检测原理：双抗体夹心法测定标本中组蛋白H3.3水平。用纯化的组蛋白H3.3抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入组蛋白H3.3，再与HRP标记的组蛋白H3.3抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组蛋白H3.3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中组蛋白H3.3浓度。
组蛋白是真核生物中一类进化上相对保守的蛋白质。由组蛋白八聚体及缠绕其上的DNA构成的核小体是真核生物染色质的基本组成单位。核小体使DNA保持固缩状态，既能维持基因组的稳定性，又能保证DNA序列可以正确地进行复制，转录，重组和修复。
核小体转移细胞的生物过程除了通过组蛋白翻译后修饰，还可以通过组蛋白研究发现，组蛋白H3变体H3.3与常规组蛋白H3相比仅有几个氨基酸的区别，但H3.3却能由特异的分子伴侣介导，整合进入染色质同时，H3.3作为一种母源因子在正常受精和体细胞核移植等细胞重编程过程中也发挥着重要作用。
应用[4][5]
用于组蛋白H3K14乙酰化调控紫色紫孢菌生长和产孢的机制研究
以紫色紫孢菌Ku80敲除菌株为出发菌株,首先利用同源重组的方法对组蛋白H3K14位点进行点突变,同时敲除修饰组蛋白H3K14乙酰化的组蛋白乙酰基转移酶gcn5,之后对Ku8K敲除菌株和各突变株的生长和产孢进行测定和比较,并结合转录组学和基因功能分析等方法研究组蛋白H3K14乙酰化调控紫色紫孢菌的生长和产孢的机制。
通过以上研究可以初步阐明组蛋白修饰调控紫色紫孢菌产孢的分子机制。主要研究结果如下:1.获得H3K14突变菌株首先获得H3K14位点突变成R和Q的H3片段,然后酶切质粒H3-3’-pPK2-sur-GFP,经过In-fusion酶连接将突变片段连接到sur基因的另一端。将构建好的突变载体通过农杆菌介导的方法转化紫色紫孢菌Ku80菌株,用氯啼磺隆筛选转化子,通过测序和Western blot的方法对转化子进行验证。
2. 获得gcn5敲除菌株首先酶切质粒pPK2-sur-GFP,然后经过In-fusion酶连接将gcn5上下游同源片段连接到sur基因的两端。将构建好的敲除载体通过农杆菌介导的方法转化紫色紫孢菌Ku80菌株,用氯嘧磺隆筛选转化子,通过PCR等方法对转化子进行验证。
3. 突变株和敲除株的生长和产孢受到影响Ku80菌株的孢子形成能力相对高于突变株和敲除株。在所研究培养基上,除PDA培养基外,H3K14Q突变株和gcn5敲除株与Ku80菌株相比生长速度均降低。然而,在PDA培养基上,H3K14R突变株的生长速度相对高于Ku80菌株,并且在其它培养基上没有显著变化。
4.各突变株和敲除株的转录组分析组蛋白的翻译后修饰会影响染色质的结构,从而会影响基因的表达。
参考文献
[1]Application methods of Steinernema feltiae,Xenorhabdus bovienii and Purpureocillium lilacinum to control root-knot nematodes in greenhouse tomato systems[J].Ilker Kepenekci,Selcuk Hazir,Ercin Oksal,Edwin E.Lewis.Crop Protection.2018
[2]Gcn5‐dependent histone H3 acetylation and gene activity is required for the asexual development and virulence of Beauveria bassiana[J].Qing Cai,Juan‐Juan Wang,Bo Fu,Sheng‐Hua Ying,Ming‐Guang Feng.Environmental Microbiology.2018(4)
[3]Essential role of Rpd3‐dependent lysine modification in the growth,development and virulence of Beauveria bassiana[J].Qing Cai,Zhi‐Kang Wang,Wei Shao,Sheng‐Hua Ying,Ming‐Guang Feng.Environmental Microbiology.2018(4)
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[5]韩晶晶.组蛋白H3K14乙酰化调控紫色紫孢菌生长和产孢的机制研究[D].云南大学,2019.