背景[1-3]
重组蛋白G抗体是用重组蛋白G为抗原制得的可以特异性结合重组蛋白G的多克隆抗体。
蛋白G是G型链球菌分离而得的细胞壁蛋白。链球菌蛋白G是链球菌表面的一种细胞壁蛋白，由近600个氨基酸组成。其N-端部分为白蛋白结合域，C-端部分是IgG结合域和细胞壁结合域。由于具有结合多种不同抗体的功能，链球菌蛋白G因此被称为一种超级抗原。
重组链球菌蛋白G可以用来检测、纯化、清除抗体以及抗体-抗原复合物，即重组链球菌蛋白G的用途类似于重组金黄色葡萄球菌蛋白A。金黄色葡萄球菌蛋白A的工业化程度由于历史原因虽然比链球菌蛋白G深厚，但是，一般来说蛋白G比蛋白A结合IgG的范围更宽广、结合IgG的力度更强劲。如果针对的是下列常见物种的IgG：人、鼠、兔、羊、牛、马等。
重组链球菌蛋白G都是把天然蛋白的白蛋白结合域、细胞壁结合域除去而保留IgG结合域，通过重组体DNA技术经过表达、纯化制得的。深圳意达凯生物科技有限公司研发、生产了迄今国内国外抗体结合能力最强的重组链球菌蛋白G,其也是按照这个传统策略研究、开发获得，但是对C1-D-2-D-C3 IgG结合域进行了一系列进化改良。
重组蛋白产品的IgG结合域与上述IgG结合域只保持约90%的同源性，然而其抗体的结合能力却提高了50%-100%。重组链球菌蛋白G结合IgG,IgG Fc,IgG Fab,IgG Fab’,IgG F(ab’)2,trifunctional antibody；但不结合scFv/di-scFv,sdAb/nanobody,BiTE以及人其他类型抗体IgA,IgD,IgE,IgM。
应用[4][5]
用于链球菌蛋白G的构建、重组表达及鉴定研究
链球菌蛋白G（streptococcal protein G）,简称SPG,是链球菌细胞壁中的一种蛋白质。它能与多种动物（牛、马、羊、大鼠、小鼠、豚鼠、猫、鸟、兔等）IgG的Fc段发生结合。Protein G的基因由血清白蛋白结合区、Fab结合区、Fc结合区、细胞壁和细胞膜结合区组成,且他们之间功能的实现互不影响,即protein G和Fc的结合能力与Fab的结合、细胞膜铆钉没有任何关系。Fc结合区由C1DC2DC3构成。
其中D为连接区,C1、C2、C3为Fc结合功能区,它们之间只有几个氨基酸不同。有研究表明C3与Fc结合办比C1、C2强。
利用化学合成的方法合成了链球菌蛋白G的C3D基因片段。然后,以其为模板,通过分子生物学的方法对蛋白G（protein G）的C3片段进行PCR扩增,拼接形成分别含有两个和三个重复C3片段的重组链球菌蛋白G,C3片段间以链接区D连接,即形成C3DC3和C3DC3DC3的形式,进而克隆到质粒pT7473中,在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。
重组表达的蛋白经过DEAE-Sepharose和IgG-Sepharose纯化,得到高纯度的重组蛋白。最后,采用非竞争性酶免疫法对重组蛋白与不同来源IgG的结合常数进行测定,实验结果显示两种重组链球菌蛋白G均可有效地与小鼠、兔及山羊等多种不同来源抗体特异性结合。这些实验结果为下一步研究奠定了基础。
参考文献
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[3]Applications of novel affinity cassette methods:use of peptide fusion handles for the purification of recombinant proteins[J].Milton T WHearn,DaniloAcosta.J.Mol.Recognit..2001(6)
[4]Solid Supports in Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Other Solid-Phase Immunoassays[J].John E.Butler.Methods.2000(1)
[5]安明岩.链球菌蛋白G的构建、重组表达及鉴定[D].华东理工大学,2011.