背景[1-3]
MV3人黑色素瘤细胞分离自人黑色素瘤组织经初代培养后形态稳定的细胞系，主要用于人黑色素瘤细胞的细胞学研究实验。黑色素瘤，通常是指恶性黑色素瘤，是黑色素细胞来源的一种高度恶性的肿瘤，多发生于皮肤，也可发生于黏膜（包括内脏黏膜）、眼葡萄膜、软脑膜等部位。
恶性黑色素瘤分为两大类：
原位恶性黑色素瘤：指肿瘤细胞仅局限于表皮或黏膜上皮层内。包括恶性雀斑样痣、浅表扩散性原位恶性黑色素瘤、肢端原位黑色素瘤。
侵袭性恶性黑色素瘤：指肿瘤细胞已突破表皮基底层或粘膜上皮层，向真皮及更深层浸润。包括恶性雀斑样黑色素瘤、浅表扩散性恶性黑色素瘤、肢端黑色素瘤和结节性黑色素瘤。
细胞复苏操作步骤：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
应用[4][5]
用于高表达ATF3人真皮成纤维细胞抑制皮肤黑色素瘤细胞生长迁移的作用与机制研究
BRAF是RAF家族的一种蛋白激酶,其功能位于RAS下游,通过磷酸化MEK激活ERK来帮助刺激细胞生长和存活。临床上用于治疗皮肤恶性黑色素瘤的BRAF抑制剂可短暂有效,但是大多数患者会产生耐药性。
肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）指的是肿瘤在发生发展过程中所处的局部环境,构成这一局部环境的细胞成分复杂,包括但不限于免疫细胞、血细胞、内皮细胞、脂肪细胞和细胞基质。肿瘤基质是肿瘤微环境的重要组成部分,主要由成纤维细胞和细胞外基质构成。在过去的几十年里,越来越多的研究成果证实TME在决定疾病进展和治疗结果方面的作用变得越来越明显。
肿瘤细胞与微环境之间的相互作用机制非常复杂,但可分为两大类:即接触式和非接触式途径。其中接触式途径涉及细胞-细胞和细胞外基质粘附分子的接触依赖性机制。而在非接触式途径中,诸多可溶性分子,如生长因子,趋化因子和细胞因子,以及可溶性的亚细胞器（包括微泡和外泌体）等在整个过程中起到至关重要的作用,最终,这些相互作用通过分泌和旁分泌机制,完成与恶性肿瘤细胞的相互作用。肿瘤微环境肿瘤基质细胞中最主要的细胞成分为成纤维细胞。最近,越来越多的相关研究成果显示,肿瘤基质组织与肿瘤抗药性的产生有很大关系,提示癌症治疗应该包括靶向基质细胞来抑制肿瘤的策略。
ATF3（activating transcription factor 3,ATF3）为ATF/CREB家族重要成员之一。作为重要的转录因子,ATF3在不同组织中表现的功能可能存在差异。ATF3基因在肿瘤发展中可能会表现出促癌基因和抑癌基因正反两方面作用。
参考文献
[1]A role for paracrine interleukin‐6 signaling in the tumor microenvironment in prostate tumor growth[J].Shu‐Han Yu,Janielle P.Maynard,Ajay M.Vaghasia,Angelo M.De Marzo,Charles G.Drake,Karen S.Sfanos.The Prostate.2019(2)
[2]Atf3 induction is a therapeutic target for obesity and metabolic diseases[J].Suji Kim,No-Joon Song,Gahee Bahn,Seo-Hyuk Chang,Ui Jeong Yun,Jin-Mo Ku,Dong-Gyu Jo,Kye Won Park.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018
[3]Expression and clinical significance of S100 family genes in patients with melanoma[J].Xiong Tingfeng,Pan Fuqiang,Li Dong.Melanoma Research.2018
[4]IL-6 family cytokines:Key inflammatory mediators as biomarkers and potential therapeutic targets[J].Nese Unver,Florencia McAllister.Cytokine and Growth Factor Reviews.2018
[5]俎廷建.高表达ATF3人真皮成纤维细胞抑制皮肤黑色素瘤细胞生长迁移的作用与机制研究[D].山东大学,2020.