背景[1-3]
牛Β-内酰胺(ΒLT)ELISA试剂盒是应用固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外检测牛Β-内酰胺(ΒLT)的水平。
已知牛Β-内酰胺(ΒLT)浓度的标准品，未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将牛Β-内酰胺(ΒLT)和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A，B和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中牛Β-内酰胺(ΒLT)的浓度呈比例关系。
Β-内酰胺(ΒLT)结构
牛Β-内酰胺(ΒLT)ELISA试剂盒操作步骤：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于基于LC-MS/MS同时测定水体中多种β-内酰胺类抗生素研究
采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱（LC-MS/MS）,在多重反应监测（MRM）模式、电喷雾离子源（ESI）正模式下对目标物进行分析检测,采用0.1%甲酸-1 g/L甲酸铵溶液作为流动相无机相（A）,乙腈作为流动相有机相（B）进行梯度洗脱,9种目标抗生素的标准曲线的相关系数（R2）在0.994-0.998之间。
以固相萃取（SPE）作为的样品前处理方法,对水样进行浓缩富集。对前处理过程中上样pH、洗脱液种类及洗脱液体积进行了系列优化,最终确定的前处理条件为上样pH=6、以4 mL 5%甲酸-甲醇溶液作为洗脱液,9种目标抗生素的加标回收率在61.4%-108.1%,相对标准偏差（n=3）小于8.3%,方法检出限均小于1.5 ng/L。采用所建立的仪器分析方法及样品前处理方法对大连周围主要的排污口、入海口及水库进行了目标抗生素的分析检测,共设置23个采样点。
结果表明,23个采样点中有18个采样点检出目标抗生素,检出浓度在0.7 ng/L-2.8μg/L之间,各点检出抗生素总浓度在ND（未检出）-2.8μg/L之间。9种目标抗生素都有检出,其中阿莫西林与青霉素G的有的检出率及检出浓度,阿莫西林检出率为34.8%,检出总浓度为6.4μg/L;青霉素的检出率为34.8%,检出总浓度为7.1μg/L。对采样点数据分析可得水库作为大连水源水受β-内酰胺类抗生素的影响较小;其他入海口及排污口中β-内酰胺类抗生素残留相对较多,主要可能的来源为生活污水、养殖废水及工业废水的排放。
参考文献
[1]Surface-coated wooden-tip electrospray ionization mass spectrometry for determination of trace fluoroquinolone and macrolide antibiotics in water[J].Jiewei Deng,Tiantian Yu,Yao Yao,Qi Peng,Lijuan Luo,Baowei Chen,Xiaowei Wang,Yunyun Yang,Tiangang Luan.Analytica Chimica Acta.2017
[2]Estimation of residual antibiotics in soil and underground water of areas affected by pharmaceutical wastewater in Lahore[J].S.Hussain,M.Naeem,M.N.Chaudhry.Journal of Water Chemistry and Technology.2017(1)
[3]Simultaneous determination of seven multiclass veterinary antibiotics in surface water samples in the Republic of Korea using liquid chromatography with tandem mass spectrometry[J].Hyung Suk Chung,Jeong‐Heui Choi,A.M.Abd El‐Aty,Young‐Jun Lee,Han Sol Lee,Sangdon Kim,Hee‐Jung Jung,Tae‐Woo Kang,Ho‐Chul Shin,Jae‐Han Shim.Journal of Separation Science.2016(24)
[4]Development and application of a dispersive liquid–liquid microextraction method for the determination of tetracyclines in beef by liquid chromatography mass spectrometry[J].S.O.S.Mookantsa,S.Dube,M.M.Nindi.Talanta.2016
[5]聂晓静.基于LC-MS/MS同时测定水体中多种β-内酰胺类抗生素[D].大连理工大学,2017.