背景[1-3]
低密度脂蛋白受体相关蛋白4抗体是一类可以特异性结合低密度脂蛋白受体相关蛋白4的多克隆抗体,主要用于体外检测低密度脂蛋白受体相关蛋白4的免疫学实验。
低密度脂蛋白受体相关蛋白(lowdensitylipoproteinreceptor-relatedprotein,LRP)是近年来发现的一种细胞表面蛋白,属于一种内吞性受体,系低密度脂蛋白受体(lowdensitylipoproteinreceptor,LDLR)基因家族中的一员。
低密度脂蛋白受体相关蛋白4免疫组化
由于其能够与多种结构及功能各异的配体相互作用,不仅可以对血脂的动态平衡及纤溶功能的稳定进行调节,而且能参与多种生长因子、细胞激酶生物学效应的发挥。近来有研究表明LRP与动脉粥样硬化发生发展的多个环节密切相关并将其视为动脉粥样硬化性疾病又一新的危险因子,因而对其理化特性及生物学功能进行深入研究具有重要的理论及实际意义。
低密度脂蛋白是富含胆固醇的脂蛋白,是一种运载胆固醇进入外周组织细胞的脂蛋白颗粒。正常人空腹时,血浆中胆固醇的2/3会与LDL结合,其余的则由极低密度脂蛋白(VLDL)携带。低密度脂蛋白可被氧化成氧化低密度脂蛋白,被氧化的低密度脂蛋白胆固醇可通俗地理解为“坏”胆固醇,因为LDL-C水平升高会增加患冠状动脉心脏病的危险性。
高浓度LDL-C是明确独立的动脉粥样硬化的危险因素,其中起作用的是氧化修饰的低密度脂蛋白胆固醇(Ox-LDL-C)。防止LDL-C被氧化是关键性的因素。当氧化修饰的低密度脂蛋白过量时,其携带的胆固醇便积存在动脉壁上久了容易引起动脉硬化。流行病学证据均显示低密度脂蛋白升高与心肌梗死和血管疾病死亡风险的增加密切相关。
应用[4][5]
用于低密度脂蛋白受体相关蛋白4诱导小鼠重症肌无力相关细胞因子的检测研究
通过建立小鼠实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)模型,以研究低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low density lipoprotein receptor-related protein 4,LRP4)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)致病性,以及与相关细胞因子的关系。
方法:选取10只8周龄雌性C57BL/6小鼠,体重为18-25g,随机分为实验组(n=5)和对照组(n=5)。采用主动免疫的方式皮下注射LRP4,以建立小鼠EAMG模型。取小鼠腓肠肌制成冰冻切片,用四甲基罗丹明结合的银环蛇毒素(TR-BTX)定位乙酰胆碱受体(AChR)(呈红色),用FITC结合的羊抗小鼠IgG抗体去定位LRP4抗体(呈绿色),再通过激光共聚焦显微镜来观察超微结构的变化。
用ELISA试剂盒分别测定实验组和对照组小鼠血清血清中细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-17的浓度。
结果:实验组中有一只小鼠左眼周边脱毛,无法睁开,实验组中部分小鼠表现为活动迟缓,撕咬抓取能力变弱,体重略微下降。
通过激光共聚焦显微镜观察,实验组腓肠肌的细胞膜表面呈现绿色荧光,再相同的部位呈红色荧光,表明抗LRP4-Ab已经与LRP4抗原结合,并且结合在神经肌肉接头处(neuromuscular junction,NMJ)。
检测的细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-17,实验组细胞因子均表现为分泌水平增多,但是通过spss17.0进行统计学分析,发现实验组与对照组之间没有明显差异(P>0.05)。
参考文献
[1]Changes in inflammatory cytokine networks in myasthenia gravis.[J].Uzawa Akiyuki,Kanai Tetsuya,Kawaguchi Naoki,Oda Fumiko,Himuro Keiichi,Kuwabara Satoshi.Scientific reports.2016(1)
[2]Serum high mobility group box 1 is upregulated in myasthenia gravis[J].Akiyuki Uzawa,Naoki Kawaguchi,Tetsuya Kanai,Keiichi Himuro,Satoshi Kuwabara.Journal of Neurology,Neurosurgery&Psychiatry.2015(6)
[3]Increased serum peroxiredoxin 5 levels in myasthenia gravis[J].Akiyuki Uzawa,Naoki Kawaguchi,Tetsuya Kanai,Keiichi Himuro,Fumiko Oda,Satoshi Kuwabara.Journal of Neuroimmunology.2015
[4]Guidelines for pre-clinical animal and cellular models of MuSK-myasthenia gravis[J].W.D.Phillips,P.Christadoss,M.Losen,A.Punga,K.Shigemoto,J.Verschuuren,A.Vincent.Experimental Neurology.2014
[5]张芷荧.低密度脂蛋白受体相关蛋白4诱导小鼠重症肌无力相关细胞因子的检测[D].延边大学,2018.