背景[1-3]
羟类固醇脱氢酶17Β抗体是一类可以特异性结合羟类固醇脱氢酶17Β的多克隆抗体,主要用于羟类固醇脱氢酶17Β的体外免疫学检测。
17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSDs)是一类NAD(P)H/NAD(P)+依赖的氧化还原酶,其主要功能是参与性激素的代谢,通过调节细胞内甾体类激素水平从而在生殖系统中发挥重要作用。
羟类固醇脱氢酶17Β
以往研究发现在一些生殖系统疾病如前列腺癌等中,17β-HSDs被显著上调,而最近的研究则显示该家族成员还参与了非甾体物质如脂肪酸和胆固醇的代谢。因此,该类酶的研究对于阐明性激素和脂代谢紊乱相关疾病的发病机制有重要意义。
哺乳类17β-羟类固醇脱氢酶通过催化17-酮基类固醇和17-羟基类固醇之间的相互转化,如:脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone)和雄烯二醇(Androstenediol),雄烯二酮(A)(Androstendion)和睾酮(T)(Testosterone),以及雌酮(E1)(Estrone)和雌二醇(E2)(Estradiol),因而在性类固醇激素,特别是雌激素和雄激素合成代谢的最终反应中有重要作用。
17β-HSD1,17β-HSD3分别为催化雌激素和雄激素合成的关键性酶,其中17β-HSD1在卵巢的表达水平很高,并能高效地催化雌酮到雌二醇的转化;而17β-HSD3是精巢特异的,并特异性地催化雄烯二酮到睾酮的转化。17β-HSD8主要在肾脏和性腺表达,而它的突变导致小鼠多囊肾。
17β羟基类固醇脱氢酶(17βHSD)为性激素合成中最后步骤的酶,催化氧化或还原反应,其作用是在受体前调节性激素的局部水平。各型17βHSD在体内有其特有的区域性分布,分布的特点与各自的功能有着密切的关系。17βHSD的结构和功能的异常与一些疾病,如肿瘤、假两性等的发生有密切关系。
应用[4][5]
用于罗非鱼三种17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD1,17β-HSD3,17β-HSD8)的克隆、表达及酶活性鉴定研究
克隆了罗非鱼这三种类型的17β-羟类固醇脱氢酶的cDNA(17β-HSD1,3,8),通过RT-PCR、Northern杂交检测其表达和组织分布,构建重组质粒进行离体表达,并通过薄层色谱进行酶活性分析。首先从GeneBank下载在其他脊椎动物中已被克隆17β-HSD1,17β-HSD3的氨基酸和核甘酸序列,并在序列保守区域设计简并引物,然后分别以罗非鱼卵巢和精巢cDNA为模板进行RT-PCR扩增得到17β-HSD1,17β-HSD3的中间片段。而17β-HSD8的3’端片段从罗非鱼EST(expression sequence tags)克隆中获得。
通过筛选卵巢cDNA文库获得17β-HSD1全长cDNA序列,而17β-HSD3和17β-HSD8的全长cDNA序列通过快速扩增cDNA末端(RACE)和末端RT-PCR扩增得到。
从罗非鱼克隆的三种类型17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD1,17β-HSD3,17β-HSD8)的cDNA全长序列分别是:1054bp、1963bp、1006b0,其开放阅读框编码的氨基酸序列分别为:289AA、325AA、256AA。罗非鱼的三种类型17β-HSDs在氨基酸水平上与其他已克隆的相应17β-HSDs都有较高的同源性。
通过三种17β-HSD的基因特异性引物进行RT-PCR分析和Northern杂交实理学硕十学位论文:罗非鱼三种17p一轻类固醉脱氢酶(1 7p一HsDI.17p一HsD3.17p一HsOS)的克隆表达及酶活性鉴定验发现,17p一HSDI的表达是卵巢特异性的,而17p一HSD3仅仅在精巢有表达。
17p一HsDS在雌雄的性腺、鳃、心脏、肝脏、肠和肾脏都有高水平表达。在罗非鱼14天的产卵周期中,17p一HSDI在卵巢的表达水平与卵子成熟过程中雌激素的水平密切相关。
参考文献
[1]Effects of Endocrine Modulators on Sex Differentiation in Birds[J].Ecotoxicology.2003(1)
[2]Morphology,endocrinology,and environmental modulation of gonadal sex differentiation in teleost fishes[J].Carlos Augusto Strüssmann,Masaru Nakamura.Fish Physiology and Biochemistry.2002(1)
[3]Temperature-dependent sex determination and gonadal differentiation in reptiles[J].C.Pieau,M.Dorizzi,N.Richard-Mercier.Cellular and Molecular Life Sciences.1999(6)
[4]Affinity purification of a cholesterol oxidase expressed in Escherichia coli[J].Yu Xin,Hailin Yang,Xiaole Xia,Ling Zhang,Chen Cheng,Guocui Mou,Jiebing Shi,Yunfei Han,Wu Wang.Journal of Chromatography B.2011(13)
[5]周林燕.罗非鱼三种17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD1,17β-HSD3,17β-HSD8)的克隆、表达及酶活性鉴定[D].西南师范大学,2004.