背景[1-3]
大鼠醇酰基转移酶(AAT)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法检测样本中大鼠醇酰基转移酶（AAT）的含量。
原理：往预先包被大鼠醇酰基转移酶（AAT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠醇酰基转移酶（AAT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
大鼠醇酰基转移酶(AAT)ELISA试剂盒
操作步骤:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于孕期边缘性维生素A缺乏对新生大鼠维生素A转运贮存及相关酶的影响研究
探讨孕期边缘性维生素A缺乏（MVAD）对胎鼠维生素A转运贮存及相关酶的影响。
方法:清洁级健康成年雌性Wistar大鼠16只（260-300g）随机分为2组,按本课题组常规方法饲以相应饲料,3周后与健康雄性Wistar大鼠2:1合笼:（1）正常对照组（control）,母鼠8只给予VA充足饲料（含VA 6500 U/kg）;（2）边缘性维生素A缺乏组（MVAD）,母鼠8只给予VA部分缺乏饲料（MVAD饲料,含VA 400 U/kg）。收集孕鼠和胎鼠血清、肝脏组织,胎盘组织。
采用高效液相色谱法测定血清、肝脏、胎盘VA含量;分别采用RT-PCR和Western blot技术检测肝脏卵磷脂视黄醇酰基转移酶（LRAT）在转录水平和蛋白水平上的变化。RT-PCR检测细胞视黄醇结合蛋白（CRBP）、STRA6在mRNA水平的变化。
结果:①血清VA浓度:MVAD饲料喂养的母鼠血清视黄醇水平明显低于VA充足饲料喂养母鼠,未见明显VA缺乏的症状;MVAD组仔鼠血清黄醇水平明显低于正常对照组。两组间有明显统计学意义。
②组织VA浓度:MVAD组母鼠肝脏视黄醇和视黄酯水平明显低于正常对照组;MVAD组胎盘视黄醇和视黄酯水平明显低于正常对照组;MVAD组仔鼠肝脏视黄醇和视黄酯水平明显低于正常对照组,两组间有明显统计学意义。
③M VAD对维生素A转运及贮存过程关键酶的影响:与正常对照组比较,MVAD组仔鼠肝脏卵磷脂视黄醇酰基转移酶（LRAT）mRNA明显下降（P<0.05）;MVAD组CRBP1和STRA6mRNA水平低于正常对照组（P<0.05）。
参考文献
[1]Retinoic acid signaling in mammalian eye development[J].Ales Cvekl,Wei-Lin Wang.Experimental Eye Research.2009(3)
[2]An essential set of basic DNA response elements is required for receptor-dependent transcription of the lecithin:retinol acyltransferase（Lrat）gene[J].Reza Zolfaghari,A.Catharine Ross.Archives of Biochemistry and Biophysics.2009(1)
[3]Vinculin and cellular retinol-binding protein-1 are markers for quiescent and activated hepatic stellate cells in formalin-fixed paraffin embedded human liver[J].Elke Van Rossen,Sara Vander Borght,Leo Adrianus van Grunsven,Hendrik Reynaert,Veerle Bruggeman,Rune Blomhoff,Tania Roskams,Albert Geerts.Histochemistry and Cell Biology.2009(3)
[4]Homeostasis of retinol in lecithin:Retinol acyltransferase gene knockout mice fed a high retinol diet[J].Limin Liu,Xiao-Han Tang,Lorraine J.Gudas.Biochemical Pharmacology.2008(12)
[5]何剑.孕期边缘性维生素A缺乏对新生大鼠维生素A转运贮存及相关酶的影响[D].重庆医科大学,2010.