背景[1-3]
琥珀酸脱氢酶染色试剂盒(四唑盐法)主要由四氮唑蓝孵育液、阴性对照组成。染色后酶活性部位呈蓝色沉淀。
琥珀酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase，简称SDH），黄素酶类，属于细胞色素氧化酶，是TCA循环中唯一一个整合于膜上的多亚基酶，在真核生物中，结合于线粒体内膜，在原核生物中整合于细胞膜上，其是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一，可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子，为线粒体的一种标志酶。
琥珀酸脱氢酶染色图
琥珀酸脱氢酸(succinatedehydrogqenase,SDH)是三羟酸循环中的主要脱氢酶,在细胞代谢中有重要作用。酶是细胞代谢、能量传递、免疫调节的重要物Chemicalbook质。原始细胞逐渐发育成熟的过程中，核糖核酸、SDH由丰富到减少,与细胞增殖规律有关。在细胞代谢中，SDH是三羟酸循环中主要的脱氢酶，其活性强弱可反应有氧氧化的情况。
实验步骤：
1.接种细胞：用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1 000-10 000个细胞接种到96孔板，每孔体积200 ul。
2.培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3.呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5 mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20 ul，继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150 ul DMSO，振荡10 min，使结晶物充分融解。
4.比色：选择490 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
应用[4][5]
用于琥珀酸脱氢酶缺陷型胃肠道间质瘤中琥珀酸脱氢酶各亚单位蛋白表达情况及基因突变检测研究
通过检测琥珀酸脱氢酶缺陷型胃肠道间质瘤（succinate dehydrogenase-deficient gastrointestinal stromal tumors,SDH-deficient GISTs）中琥珀酸脱氢酶各亚单位的蛋白表达及基因突变情况,分析蛋白表达缺陷与其基因突变之间的关系,探讨其蛋白表达缺陷与临床病理特征及预后之间的关系,为更有针对性地治疗SDH缺陷型GISTs提供理论指导。
方法:运用免疫组织化学EnVision二步法检测GISTs病例肿瘤组织中琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）各亚单位的蛋白表达情况;聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增SDHA基因外显子9、SDHB基因外显子1、2、3、4、5、6、7、SDHC基因外显子1、3、4及SDHD基因外显子1、2、3,DNA直接测序了解其突变情况;并对蛋白表达缺陷（阴性）病例进行临床资料分析及随访。
结果:在171例GISTs中,发现162例SDHB蛋白表达阳性,占94.7%（162/171）。171例GISTs中SDHB蛋白表达缺陷（阴性）9例,占5.3%（9/171）,其中男性2例,女性7例;首诊年龄15岁-78岁（中位年龄39岁,平均年龄41岁）;肿瘤均发生于胃;肿瘤直径0.5-15.0cm（平均6.9cm）;上皮样细胞型、梭形细胞型和混合细胞型各3例;其中4例肿瘤在胃壁内呈多结节状（丛状）生长。
1例发生腹腔种植转移,1例发生脉管内浸润,其余7例均未发现脉管与神经浸润及转移。9例SDHB缺陷型GISTs中,发现SDHA蛋白表达缺陷（阴性）2例（1.2%,2/171）;未发现SDHC及SDHD蛋白表达缺陷（阴性）病例。在9例SDHB蛋白表达缺陷（阴性）病例中,7例PCR扩增成功,均存在SDHB基因突变,其中4例存在SDHB基因外显子1点突变,1例存在SDHB基因外显子7插入突变,1例存在SDHB基因外显子1点突变及外显子4杂合性突变,1例存在SDHB基因外显子1点突变及外显子6缺失突变。
参考文献
[1]Dual loss of succinate dehydrogenase（SDH）and complex I activity is necessary to recapitulate the metabolic phenotype of SDH mutant tumors[J].Doriane Lorendeau,Gianmarco Rinaldi,Ruben Boon,Pieter Spincemaille,Kristine Metzger,Christian J?ger,Stefan Christen,Xiangyi Dong,Sabine Kuenen,Karin Voordeckers,Patrik Verstreken,David Cassiman,Pieter Vermeersch,Catherine Verfaillie,Karsten Hiller,Sarah-Maria Fendt.Metabolic Engineering.2017
[2]Germline variants in familial pituitary tumour syndrome genes are common in young patients and families with additional endocrine tumours[J].Sunita M C De Sousa,Mark J McCabe,Kathy Wu,Tony Roscioli,Velimir Gayevskiy,Katelyn Brook,Lesley Rawlings,Hamish S Scott,Tanya J Thompson,Peter Earls,Anthony J Gill,Mark J Cowley,Marcel E Dinger,Ann I McCormack.European Journal of Endocrinology.2017(5)
[3]Conventional Risk Stratification Fails to Predict Progression of Succinate Dehydrogenase–deficient Gastrointestinal Stromal Tumors:A Clinicopathologic Study of 76 Cases[J].Emily F.Mason,Jason L.Hornick.The American Journal of Surgical Pathology.2016(12)
[4]Renal carcinoma associated with a novel succinate dehydrogenase A mutation:a case report and review of literature of a rare subtype of renal carcinoma[J].Yasemin Ozluk,Diana Taheri,Andres Matoso,Oner Sanli,Neslihan Kayisoglu Berker,Evgeny Yakirevich,Sohail Balasubramanian,Jeffrey S.Ross,Siraj M.Ali,George J.Netto.Human Pathology.2015(12)
[5]张亚娟.琥珀酸脱氢酶缺陷型胃肠道间质瘤中琥珀酸脱氢酶各亚单位蛋白表达情况及基因突变检测[D].贵州医科大学,2018.