背景及概述[1]
人参皂苷F2是人参中含有的一种高活性的二醇型皂苷。人参作为世界驰名的中药,其应用历史已相当久远。人参皂苷是人参的主要有效成分,至今为止,人们已经从人参中分离出至少40多种皂苷单体。根据皂苷元结构的不同,目前人参皂苷可分为二醇型、三醇型和齐墩果酸型三类,每一类皂苷的苷元结构相同,仅是连接的糖基侧链不同,但药理活性却有着显著的差别。现代研究表明皂苷上的糖链对其生物活性有重要影响,去除部分糖基往往能改变其肠道的吸收率和活性作用。如何将人参中含量较高的皂苷转化为含量较低的皂苷,或将药用价值低的皂苷转化为药用价值高的皂苷,一直是人参研究的热门课题。
制备[1-2]
报道一、
采用查氏培养基培养镰孢霉菌ECU2042,培养基组成:蔗糖30g/l,NaNO33.0g/l,K2HPO41.0g/l,KCl0.5g/l,MgSO4·7H2O0.5g/l,FeSO4·7H2O0.01g/l。
种子液在30℃、180rpm摇床中培养18小时后,按4%的接种量接入到500ml摇瓶中(装液量100ml),在同样条件下培养72小时后,过滤收集菌体。
采用研磨的方法破碎细胞,细胞破碎液用高速冷冻离心机离心(12,000rpm,30min),收集上清液,冰浴条件下缓慢加入等体积的冷冻丙酮,继续搅拌30分钟后用高速冷冻离心机离心,沉淀经真空冷冻干燥即为镰孢霉菌粗酶制剂。
在100ml磨口三角瓶中依次加入300mg所制得的粗酶,60mg人参皂苷Rb1,再加入30ml醋酸盐缓冲液(NaAc/HAc,0.2M,pH5.0),塞紧磨口塞,用生料带封口,在50℃下200rpm旋转式摇床上反应72小时后,补加300mg粗酶,继续反应48小时,分别加入正丁醇30ml萃取4次,收集正丁醇相,旋转蒸发浓缩后,经制备色谱柱(VenusilXBPC18)分离,得到16mg人参皂苷F2,转化率约为43.2%,收率为87%,制备所得人参皂苷F2的纯度≥95%。
报道二、
将2kg的红参、白参、新鲜人参、参须或它们的人参叶、人参花、人参果实放入20L的乙醇中,回流提取3次后,在15℃沉降6天。之后,通过滤布过滤和离心分离法分离出残渣和滤液,将分离出的滤液经减压浓缩得到的浓缩液悬浮于水中,采用1L乙醚提取5次来去除色素,将水层采用lL的1-丁醇提取3次。将由此获得的所有的1-丁醇层采用5%KOH处理后,用蒸馏水洗涤,之后,减压浓缩获得1-丁醇浓缩液,将其溶于少量的甲醇中,然后加入大量的乙酸乙酯,通过将生成的沉降物干燥,获得40~80g的人参精制皂甙(含有人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rf等)。
将10g上述人参精制皂甙(含有人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rf等)溶解于1L水中。然后向上述混合液中添加相对于底物200重量%的从棘孢曲霉菌中分离出的果胶酶后,在30℃反应24小时。通过薄层色谱法周期性地确认底物是否完全耗尽,在沸腾水浴中加热10分钟使酶失活,终止反应。最后,向反应液中按1:1的比例(相对于反应液的体积比)加入乙酸乙酯,提取3次、浓缩后,通过硅胶柱色谱法(氯仿:甲醇=9:1)分离出人参皂苷F2、Mc化合物和O化合物。
应用[3]
CN201110166892.9报道了一种三七养肤膏霜类化妆品,由从文山优质三七中提取的三七有效成分,人参皂苷Rc,人参皂苷F2,三七皂苷Fe,三七皂苷Fc等分别配伍柿叶提取物、维生素E、青刺果提取物、胶原蛋白、丙三醇、平平加、羊毛脂、聚氧乙烯山梨糖醇酐油酸脂、泥泊金甲脂和水组成,属于天然美容化妆品。具有肌肤光滑细腻、丝滑弹性,使皮肤恢复青春光彩、细嫩滑爽,消除眼部细小皱纹和黑眼圈,另外还收紧颈部肌肤,增加颈部肌肤的弹性等功能。
参考文献
[1][中国发明,中国发明授权]CN200910045639.0酶促水解人参皂苷Rb1制备人参皂苷F2的方法
[2][中国发明,中国发明授权]CN201680062008.8利用酶法从人参的皂甙中选择性地制备人参皂苷F2、Mc化合物及O化合物的方法
[3]CN201110166892.9三七养肤膏霜类化妆品