背景[1-3]
促进凋亡基因抗体是一类可以特异性结合促进凋亡基因的多克隆抗体，主要用于体外检测促进凋亡基因的免疫学实验。
细胞凋亡的基因调控：
细胞凋亡指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。生物体内细胞在特定的内源和外源信号诱导下(其死亡途径被激活(并在有关基因的调控下发生的程序性死亡过程。是程序性死亡过程的一种主要形式(强调的是形态学上的改变。它涉及染色质凝聚和外周化、细胞质减少、核片段化、细胞质致密化、与周围细胞联系中断、内质网与细胞膜融合(最终细胞片段化形成许多细胞凋亡体)被其他细胞吞入。
细胞凋亡是在基因调控制下的细胞自我消亡过程。现已证明，与细胞增殖和癌变的原癌基因和抑癌基因都影响细胞凋亡，按其功能分为两类，一类是启动和促进细胞凋亡的基因如：C-myc、P53、Fos、c-rel、c-jun、Tcl-30、Fas、Rb等，另一种是抑制细胞凋亡的基因如：Bcl-2、Werners、Adenovirus等。但一些细胞外因素也可诱导细胞凋亡，如TNF、辐射及射线等。细胞凋亡基因亦受多种凋亡信号传导途径的调节。
促进凋亡基因抗体免疫组化
细胞凋亡基因：
ced基因：线虫的eed．3和ced一4为促凋亡基因，哺乳类动物和eed．3相似基因为ICE，是一种半胱氨酸蛋白酶；ted一9是抑制凋亡基因Il9】，人的bcl-2和物促凋亡基因。ICE作用于IL．1p前体。抑制ICE的基因有牛痘病毒的Crm A和杆状病毒的P53，对细胞凋亡都有较强的抑制作用；
hd．2家族：hc1．2家族有Bcl—x、Bax、Bak和Bad等成员，bc1．2可以通过CED一4作用调节caspases和线粒体通透性转变，从而防止凋亡产生，与肿瘤细胞增殖和癌变有关[201，而Bax有促进凋亡的作用；
c．myc家族：c．myc具有促进细胞增殖和促使细胞凋亡双向的调节作用，这主要决定于其上游的信号来源；~TNV受体家族：Fas是TNF受体家族中研究最详细的成员，Fas为死亡受体。Fas—L是T淋巴细胞产物，Fas和Fas．L结合诱导细胞凋亡；~p53基因：野生型诱导细胞凋亡，通过细胞凋亡抑制肿瘤的生长。它作用在细胞周期和细胞受损伤时，促使细胞凋亡；
Rh和E2F：Rb有促凋亡作用，E2F包括E2F一1、E2F一2、E2F一3、E2F一4和E2F一5，共5种紧密相关的转录因子，其中E2F一1、E2F，2和E2F，3结合Rb蛋白，而E2F一4和E2F-5主要结合Rb的相关蛋白p107和p130。E2F一1具有双重作用，当E2F一1与Rh蛋白结合时，细胞周期进程被抑制。但当Rh蛋白缺失时E2F一1刺激细胞增殖。可能细胞内E2F的浓度或者其它细胞周期调节因子存在与否，影响E2F．1决定发挥细胞生长还是细胞凋亡作用[Z21；
应用[4][5]
用于蜕皮激素和保幼激素对家蚕丝腺凋亡基因表达调控的研究
对五龄中期的家蚕进行了蜕皮激素的饲喂处理,发现Bm30kc6、Bm Fadd、Bm Daxx及Bm Dredd四个基因均出现了一定特征性的变化,说明了这四个基因都与家蚕丝腺的凋亡有着极为重要的联系,并推测他们都属于蜕皮激素的下游靶基因。
本实验使用不同浓度的保幼激素、蜕皮激素、不同浓度组合的混合激素和不同饲养温度对五龄中、后期家蚕进行处理,实验结果确认Bm30kc6、Bm Fadd、Bm Daxx及Bm Dredd四个基因,均影响蚕-蛹变态期细胞凋亡。
检测了家蚕五龄中、后期四个凋亡相关基因的表达量。
结果发现:Bm30kc6基因和Bm Daxx基因具有大致相同的表达规律,从进入到五龄中期开始,两个基因表达量开始逐渐上升,分别在五龄第五天和第六天到达个峰值,随后下降。在进入到吐丝期以后,开始大量表达,达到第二个峰值。对于Bm Fadd和Bm Dredd基因来说,在进入到五龄中期以后,基因表达量开始缓慢上升,中间并没有太大的变化。进入到吐丝期以后,基因表达量开始迅速上升,在吐丝24 h以后达到峰值。
2. 五龄中期不同浓度蜕皮激素处理家蚕能够显著缩短其五龄发育时间。实验表明:在蜕皮激素处理后的短时间内,四种凋亡基因均受到促进作用。以Bm30kc6基因为例,本应出现在五龄第五天的峰值被提前到了五龄第三天12 h。因此家蚕提前吐丝,丝腺提前凋亡,导致了五龄时间的大幅缩短。在对五龄家蚕后期处理后,Bm30kc6基因的表达量被严重抑制,但其余三种促凋亡基因大量表达,表达峰值均被提前,其中低浓度组和中浓度组的表达峰值被提前到了五龄第七天,高浓度组则被提前到了五龄第六天12 h。由于丝腺的快速凋亡,使得家蚕提前进入到了变态时期,提前化蛹。
3. 五龄中期不同浓度保幼激素处理家蚕能够显著延长其五龄发育时间。实验表明:较高浓度的保幼激素能够使家蚕丝腺细胞存活的时间延长。外源的保幼激素注射到家蚕体内后,影响了家蚕体内分泌器官的活性,改变了其自身激素的分泌状态,家蚕为了维持体内激素相对稳定,大量分泌蜕皮激素。五龄后期保幼激素处理后的幼虫甚至可能更早地进入吐丝期。
4.五龄中期不同浓度组合的混合激素处理家蚕能够显著缩短或延长其五龄发育的时长。通过实验我们发现两者存在着十分复杂的相互作用,当蜕皮激素浓度高于保幼激素时,可以使家蚕的五龄经过缩短;当两者浓度相同或保幼激素浓度高于蜕皮激素时,家蚕的五龄经过却延长。蜕皮激素能够将凋亡基因表达的峰值提前,促使家蚕提前吐丝结茧。而当保幼激素浓度较高时,使幼虫时期丝腺等组织仍能维持自身的形态和功能,所以延长了五龄的时长。
参考文献
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[3]Characterization of short-lived intermediates produced during replication of baculovirus DNA[J].Victor S.Mikhailov,George F.Rohrmann.Virus Research.2009(1)
[4]p53-Independent Apoptosis Limits DNA Damage-Induced Aneuploidy[J].McNamee,Laura M,Brodsky,Michael H.Genetics.2009(2)
[5]林桃桃.AcMNPV-BmK IT感染Sf9细胞对凋亡基因表达和actin重排的影响[D].山西大学,2015.