背景[1-3]
猪血栓调节蛋白(TM)ELISA KIT可以检测血清、血浆、组织中血栓调节蛋白(TM)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血栓调节蛋白(TM)水平。用纯化的血栓调节蛋白(TM)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入血栓调节蛋白(TM)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的血栓调节蛋白(TM)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中血栓调节蛋白(TM)含量。
猪血栓调节蛋白(TM)ELISA KIT
猪血栓调节蛋白(TM)ELISA试剂盒操作步骤
标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
用于ESW对兔缺血坏死股骨头内血栓调节蛋白（TM）含量影响的实验研究
观察体外冲击波疗法（Extracorporealshockwave,ESW）对兔激素性股骨头缺血坏死病理模型中凝血纤溶系统指标之一的血栓调节蛋白（TM）含量变化的影响，从而进一步揭示激素性股骨头缺血坏死的发病机制及其ESWT治疗激素性股骨头缺血坏死的机理。
方法：选取体重2.5-3.5kg健康新西兰大白兔54只，雌雄不限，采用抽签法将54只兔随机选取18只为正常对照组（A组），余36只采用内毒素+激素诱导股骨头坏死方法造模，大肠杆菌内毒素（LPS）和甲基强的松龙（MPSL）给药结束后随机分为模型组（B组）、冲击波治疗组（C组）各18只。造模同时A组给予相应的生理盐水。C组在给药后第二周开始对兔股骨头进行冲击波治疗。正常对照组（A组）、模型组（B组）、冲击波治疗组（C组）在造模给药的同时于第4、6、8周分别于18只兔中随机选取6只兔进行耳缘动脉的采血操作，采血结束后使用空气栓塞法处死兔标本并留取兔股骨头，进行标本病理形态学的大体观察。抽取的血样进行ELISA法检测血液中TM的含量，并对检测结果进行定量分析。
结果：1.大体观察可见,冲击波治疗组（C组）股骨头与同时期模型组（B组）股骨头比较,在外形轮廓、光滑度、色泽、骨质松脆程度、冠状位剖开后冠状面大体改变等方面均有不同程度的改善，尤其是ESWT干预后8周C组与B组股骨头病理形态学比较表现明显。
2. 正常对照组（A组）、模型组（B组）与冲击波治疗组（C组）血栓调节蛋白（TM）的对比：4周时B组较同时间点C组无差别（P＞0.05）,但均较A组升高（P<0.05）；6周、8周时B组均较同时间点A组、C组升高（P<0.05），A组、C组间无差别（P＞0.05）。
结论：体外冲击波疗法（ESWT）可以促进激素性缺血坏死的股骨头内凝血纤溶系统指标之一的血栓调节蛋白（TM）水平值的降低,改善坏死股骨头的局部血液循环状态，从而促进缺血坏死的股骨头得到进一步的修复。
参考文献
[1]Mechanisms of elevation of serum and urinary concentrations of soluble thrombomodulin in diabetic patients:Possible application as a marker for vascular endothelial injury[J].Yoshimasa Aso,Toshihiko Inukai,Yoshihiro Takemura.Metabolism.1998(3)
[2]Use of Extracorporeal Shock Waves in the Treatment of Pseudarthrosis,Tendinopathy and Other Orthopedic Diseases[J].Gerald Haupt.The Journal of Urology.1997(1)
[3]Inducible osteonecrosis in a rabbit serum sickness model:Deposition of immune complexes in bone marrow[J].K.Nakata,K.Masuhara,N.Nakamura,T.Shibuya,N.Sugano,M.Matsui,T.Ochi,K.Ohzono.Bone.1996(6)
[4]Plasma thrombomodulin levels in coronary sinus blood in patients with coronary artery disease[J].K.Hoshi,T.Inoue,H.Kakoi,T.Satoh,H.Yamaguchi,Y.Sakai,S.Morooka,Y.Takabatake.Blood Coagulation&Fibrinolysis.1995(2)
[5]张跃庭.ESW对兔缺血坏死股骨头内血栓调节蛋白（TM）含量影响的实验研究[D].山西医科大学,2013.