背景及概述
人参(Panax ginseng C． A Mayer)为五加科人参属多年生草本植物，是我国的传统名贵中药。人参中的主要活性成分是人参皂苷，现已分离并鉴定的人参皂苷有 40 多种。根据皂苷元结构的不同，人参皂苷分为达玛烷型与齐墩果烷型，其中达玛烷型四环三萜人参皂苷又分为原人参二醇型(如Rb1，Rb2，Rb3，Rc和Rd)与原人参三醇型(如Re和Rg1)，是人参属植物中存在的主要人参皂苷，含量较高，称为常见人参皂苷。而一些次级人参皂苷，如20(S)－Rg3，20(R)－Rg3，Rk1，Rg5，20(S)－Rh1，20(R)－Rh1，Rg6，F4，Rk3，Rh4，20(S)－Rh2，Rk2和Rh3等在人参属药材中含量很低，称为稀有人参皂苷。人参皂苷Rk2能有效抑制肿瘤细胞生长，诱导分化癌细胞，具有抗浸润和抗转移疗效。
制备
Rk2一般通过水解人参皂苷二醇组获得，但水解成分复杂，不利于分离并准确鉴定结构。本文通过酶法水解高纯度的人参皂苷Rk2，水解产物通过高分辨质谱和核磁确证[1]。
图1人参皂苷Rk2的制备反应式
试剂与仪器
葡萄糖苷酶(来源于Terrabacter ginsenosidimutans)由邦泰生物工程(深圳)有限公司基因改造获得;其他化学试剂(AR)购于阿拉丁化学试剂有限公司。
恒温加热磁力搅拌器，巩义市予华仪器有限责任公司;液相色谱仪(1260，紫外检测器 1260)，美国安捷伦;超高分辨飞行时间质谱仪(maXis impact UHR －TOF)，德国 Bruker 公司;制备液相色谱(NS4000)，汉邦科技。
实验方法
Rh2、Rh3及Rk2混合物的制备
在室温条件下，在一个干净的1L圆底烧瓶中加入20g人参皂苷Rg3，加入20mlDMSO和100mlpH为7－8的磷酸钠缓冲液，充分搅拌至Rg3完全溶解，然后加入20gβ－葡萄糖苷酶，升温至40反应18h后，Rg3消耗完全，加入稀盐酸调节pH至4－5，室温搅拌1h。
Rk2的分离和鉴定
在反应液中加入硫酸铵，待溶解完全后再按一定配比加入500ml乙醇和乙酸乙酯的混合物溶液，充分摇匀后静置分层，下层为水相，上层为有机相;取上层的有机相置旋蒸仪中旋蒸，在70条件下蒸馏至体积的1/5，趁热过滤，再用1%体积的纯水冲洗滤饼，烘干后即得粗品。取2g粗品溶于3ml乙腈中，用0．45um膜过滤，滤液进行制备色谱分离。
结论
通过采用酶法将Rg3进行水解，水解产物不仅仅有Rh2，还有另外两个稀有人参皂苷Rh3及Rk2，此方法为制备高纯度稀有人参皂苷Rh3及Rk2提供了一条简便高效的生产方法，具有巨大的经济效益和社会价值。
参考文献
[1]Fuzzati N． Analysis methods of ginsenosides［J］．Journal of Chromatography B，2004，812:119 －133