背景[1][2]
单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。经多年研究,鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原,尤其是鼠源性的免疫原,而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难,直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系,得到了稳定的兔-兔杂交瘤,才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。
近年兔单克隆抗体技术日臻完善,目前商品化的兔单抗已达数千种。α平滑肌肌动蛋白是平滑肌的主要标志物,其含量对平滑肌的收缩能力具有较大影响,可反映平滑肌数量及其收缩能力的改变。α平滑肌肌动蛋白在肿瘤新生血管的生成过程中起重要作用,其机制是通过调节相关细胞的增殖活性以及诸如血小板生成素等促血管生成因子的表达来直接或间接地促进肿瘤血管的生成。
研究观察正常乳腺组织间质中,α平滑肌肌动蛋白表达很弱,基本上不表达;在原位癌组织间质中, 平滑肌肌动蛋白表达相对增强;在进入浸润阶段后,肿瘤间质内存在着大量表达 平滑肌肌动蛋白的肌纤维母细胞成分。随着浸润性增加,临床分期的进展,淋巴结转移的出现,间质仅平滑肌肌动蛋白表达增强,反映了乳腺从正常组织向原位癌、原位癌向浸润癌发展的过程。
α-平滑肌肌动蛋白兔单克隆抗体(HRP结合物)识别总α平滑肌肌蛋白的内源水平。活性物种包括人,老鼠,大鼠。α平滑肌肌动蛋白兔单克隆抗体是通过用对应于人α-平滑肌肌动蛋白的氨基末端残基的合成肽免疫动物而产生的。
α-平滑肌肌动蛋白兔单克隆抗体于-20℃保存,Western-抗稀释液-20℃或4℃保存,一年有效。Western-抗稀释液优先推荐4℃保存,长期不使用可以考虑-20℃保存,但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。 如果α-平滑肌肌动蛋白兔单克隆抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验,请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,请4℃保存。
回收后重复使用的α-平滑肌肌动蛋白兔单克隆抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10,000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得的检测效果,请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
主要参考资料
[1] 李秀清, 路兰红. α 平滑肌肌动蛋白, 波形蛋白与陷窝蛋白 1 在乳腺癌组织中的表达及临床意义[J]. 医学综述, 2014, 20(22): 4174-4175.
[2] 朱艳芬, 宋泽庆. 哮喘小鼠气道重塑中 α 平滑肌肌动蛋白的表达[J]. 中国免疫学杂志, 2011, 27(10): 934-937.