背景[1][2]
信号转导和转录激活因子5(signal transducers andactivators of transcription 5,STAT5)是一类能与磷酸化的酪氨酸结合的Src 同源区2(SH2)的蛋白质分子,广泛参与细胞的增殖和分化,调节细胞的凋亡,并与白血病、自身免疫性疾病及乳腺癌等多种疾病的发生、发展、预后密切相关,是近年来乳腺癌研究领域的热点。
STAT5 包括由不同基因编码的5a和5b两个亚型,分别含有794 和786 个氨基酸。5a和5b的相对分子质量(Mr)分别为95 000 和90 000~92 000,其编码基因均位于人类染色体17q11 .2,两者的同源性为96 %。STAT5 参与许多细胞因子、激素和生长因子的信号转导,在调控造血细胞和淋巴细胞系的增殖、分化和凋亡中起重要作用。单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。
经多年研究,鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原,尤其是鼠源性的免疫原,而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难,直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系,得到了稳定的兔-兔杂交瘤,才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。近年兔单克隆抗体技术日臻完善,目前商品化的兔单抗已达数千种。
STAT5a 兔单克隆抗体 -20℃保存,Western一抗稀释液-20℃或4℃保存,一年有效。Western-抗稀释液优先推荐4℃保存,长期不使用可以考虑-20℃保存,但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。 如果 STAT5a 兔单克隆抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验,请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,请4℃保存。
目前用于研究的抗STAT5 抗体国内还没有生产,进口的抗STAT5 抗体价格非常昂贵。有实验应用小鼠重组STAT5 蛋白制备了兔抗STAT5 抗体,并分析了STAT5 蛋白在人乳腺癌细胞株及乳腺良恶性(STAT5a兔单克隆抗体)肿瘤组织中的表达情况。
应用[1]
1. 在生物标记物开发中的应用
兔单克隆抗体包括 STAT5a兔单克隆抗体广泛用于生命科学研究的各个领域,尤其在免疫组织化学以及检测蛋白的转译后修饰方面具有独特优势。至今已有100多种兔单克隆抗体开发用于癌症的IHC临床诊断与研究,其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC诊断试剂盒。
在蛋白修饰研究领域,如蛋白的磷酸化,在与疾病相关的蛋白质信号通路中起到了至关重要的作用,使用磷酸化蛋白的兔单克隆抗体可以非常清楚地显示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多种磷酸化特异性的兔单克隆抗体面世。
2. 在治疗抗体药物开发中的应用
临床使用的大多数治疗用抗体均需经体外亲和力成熟这一步骤,以提高抗体的亲和力。这一过程常需8至12个月,最终亲和力在纳摩尔级(10-9 mol/L)。兔单抗不需使用体外亲和力成熟,就能达到10-11至10-13 mol/L。这种高亲和力不仅减少抗体的临床使用量,还能减少由于使用大量抗体带来的副作用。但这种高亲和力的优势还需在动物和临床试验中进一步证实。
另外,与鼠单抗的人源化相比,兔单克隆抗体的人源化更容易。因为,兔单克隆抗体主要由一种重链及轻链基因构成,通过分析大量的兔单克隆抗体序列发现,兔与人的抗体同源性更高,约60%~76%,而小鼠与人的抗体同源性略低,为57%~72%,说明用兔单克隆抗体开发药物前景更广阔。
主要参考资料
[1] 李婷婷,崔慧斐. 兔单克隆抗体的发展及应用前景[J]. 食品与药品,2012,14(9): 373-376.
[2] 陈晶, 单保恩, 陈兴, 等. 兔抗 STAT5 抗体的制备及其在乳腺癌诊断中的应用[D]. , 2004.