背景及概述[1][2]
黄草乌(Aconitum vilmorinianum Kom) 为毛茛科乌头属植物,主要分布于滇中及滇西部,是云南特色药用植物,具有祛风除湿、消肿止痛的功效,常用于冬季进补或治疗各种风湿性疾病及疑难杂症,但因安全范围较窄,使用不当或被非法使用导致中毒或死亡的案例日益增多。
滇乌头碱(Yunaconitine) 为黄草乌中含量较高的一种双酯二萜生物碱,又叫异乌头碱、黄草乌碱乙,为二萜生物碱,分子式C35H49O11,分子量659.77, 熔点142℃‑143℃,可溶于甲醇、乙醇溶液,易溶于丙酮、氯仿、二氯甲烷和酸水,不溶于石油醚和水。滇乌头碱具有抗炎、镇痛和局部麻醉作用。但其毒性较大,常进行分子结构修饰,降低毒性,做为粗茎乌头碱合成原料。现有提取滇乌头碱的方法,一般采用酸水渗漉或有机试剂提取,再萃取和柱层析。这样有机试剂和酸水用量较大,因为一般植物中滇乌头碱含量较低,在1‰左右,同时现有乌头类药 材中都有多种毒性生物碱,容易造成人员中毒。采用超临界CO2萃取是比较理想方法,即可避免乌头生物碱在提取中减少,有是一种无污染提取方法。如“亚东乌头总生物碱的超临界CO2萃取及含量测定”,该方法取得了很好的收率和效果,工艺专属性差。
药代动力学[2]
采用1.1 mg/kg 滇乌头碱剂量灌胃给药大鼠,建立滇乌头碱的大鼠中毒模型,并于给药后2h 处死大鼠,迅速提取心血及11 种脏器组织,采用UPLC-MS/MS 法检测中毒大鼠生物检材中滇乌头碱的含量,统计学分析发现:灌胃滇乌头碱2 h 后,滇乌头碱在大鼠体内分布广泛,以胃、小肠和肝脏组织中的含量较高,即消化道分布较高,提示滇乌头碱的组织分布可能与外排转运蛋白有关,滇乌头碱可能影响P- 糖蛋白等转运体的表达水平,从而影响滇乌头碱的药代动力学特征,组织分布、药效和毒性,但具体机制有待于进一步研究.
应用[3-5]
1)抗炎和镇痛作用:滇乌头碱对毛细血管通透性、不同致炎剂产生的足跖肿胀、白细胞游走和棉球肉芽组织增生均有明显抑制作用。摘除双侧肾上腺后滇乌头碱抗炎作用仍存在,但不延长生存时间。测痛方法证实滇乌头碱有镇痛作用。对酵母致热大鼠有明显解热作用。
2)免疫调节作用。从云南产的乌头属植物根茎中分得的滇乌头碱(YAc)毒性极高,生理活性亦强。YAc ip 50μg/kg能显著延长小鼠耳后移植心肌的存活时间,与泼尼龙作用相近,并对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的迟发型超敏反应有抑制倾向。YAc对抗体形成无明确的抑制作用,但能提高血清总补体的活性及网状内皮系统的吞噬功能,有助于炎症反应中病原物质的清除。
3)杀菌、抗菌作用。滇乌头碱作为杀菌、抗菌剂,能有效抑制多种植物病原菌。应用在抗植物霜霉病(Plasmopara viticola),抗植物网斑病菌(Pyrenophora teres),抗植物小麦叶斑病(Septoria tritici),抗植物禾顶囊壳(Gaeumannomyces graminis)和抗植物黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)方面。滇乌头碱在应用时,首先采用DMSO溶解制备成母液。其应用验证试验如下:取温室中植物葡萄的叶片和叶段,放置在有水琼脂培养的多孔板中(24孔板),叶片或叶段预先喷洒不同浓度的测试溶液。喷洒后接种病原菌霜霉病,培养9天后,根据叶片未感染病原菌面积计算抑制率。浓度为20PPM或60PPM的滇乌头碱对霜霉病的抑制率为20%,浓度为200PPM的滇乌头碱抑制率为50%。
制备[1]
一种滇乌头碱的纯化方法,其特征在于包括以下步骤:以黄草乌药材为原料,粉碎,加入醇浸润1‑2小时,加入萃取釜中,采用超临界CO2萃取,收集滇乌头碱萃取物,用酸水溶解,过滤,加入阳离子交换树脂吸附,碱性醇溶液洗脱,洗脱液减压浓缩,加二氯甲烷萃取,萃取液浓缩,加氧化铝干燥后装柱,用石油醚‑二氯甲烷混合溶液洗脱,薄层检测,收集滇乌头碱流分,洗脱液浓缩小体积放置结晶,结晶物干燥即得滇乌头碱产品。
含量测定[6]
同时测定制黄草乌中滇乌头碱和8-去乙酰基滇乌头碱的方法,包括对照品溶液制备、供试品溶液制备、检测步骤,具体包括:
A、对照品溶液制备:分别精密称取滇乌头碱和8-去乙酰基滇乌头碱,加0.1%的盐酸甲醇配制成滇乌头碱浓度16.11mg/mL、8-去乙酰基滇乌头碱浓度为30.13mg/mL的混合溶液,得到对照品溶液;
B、供试品溶液制备:取制黄草乌粉末2.00g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨水2mL润湿,加乙醚20mL,超声处理提取,循环提取2~4次,合并提取液,蒸干,残渣加0.1% 的盐酸甲醇溶解并定容到10mL容量瓶中,摇匀,滤过,取续滤液,0.45μm微孔滤膜滤过,得到供试品溶液;
C、检测:将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪进行检测。
主要参考资料
[1] CN201010603865.9 一种滇乌头碱的纯化方法
[2] UPLC- MS/MS 法研究滇乌头碱在大鼠体内组织的分布
[3] 滇乌头碱的抗炎和镇痛作用
[4] 滇乌头碱的免疫调节作用
[5] CN201210471272.0 滇乌头碱在农药方面的应用
[6] CN201510101815.3 一种同时测定制黄草乌中滇乌头碱和8-去乙酰基滇乌头碱的方法