背景[1-3]
人胰岛素受体底物2(IRS-2)ELISA KIT用于测定人血清、血浆及相关液体样本中胰岛素受体底物2(IRS-2)含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中胰岛素受体底物2(IRS-2)水平。用纯化的胰岛素受体底物2(IRS-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素受体底物2(IRS-2)，再与HRP标记的胰岛素受体底物2(IRS-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素受体底物2(IRS-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中胰岛素受体底物2(IRS-2)浓度。
人胰岛素受体底物2(IRS-2)ELISA KIT
准备试剂与收集血样
1.收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。正常标本测定前用标本稀释液作1：1 0稀释（取2 0ul，加标本稀释液18 0ul,稀释1 0倍）。
2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成2 0 000U/ml的溶液。设标准管8管，管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在管中加入2000 0 U/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:1 0倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
检测程序
1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3.每孔中加入抗体工作液10 0ul。将反应板充分混匀后置37℃6 0分钟。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃3 0分钟。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
8.每孔加入100ul终止液混匀。
9.30分钟内用酶标仪在45 0 nm处测吸光值。
结果计算与判断
1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.以标准品20 00、100 0、500、250、125、62.5、31.2、0 U/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应OLab含量，再乘上稀释倍数1 0即可。
应用[4][5]
用于慢性间歇性低氧对大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2及胰岛素受体底物2表达的影响研究
根据OSAHS的病理生理特征建立一个符合其特征的慢性间歇性低氧实验动物模型,为研究睡眠呼吸疾病提供一个可靠的实验平台。通过建立慢性间歇性低氧及复氧的动物模型,探讨慢性间歇性低氧所致的脂肪因子以及复氧对大鼠糖代谢及肾脏葡萄糖转运蛋白2（GLUT-2）、胰岛素受体底物2（IRS-2）表达的影响。方法:将24只SD雄性成年大鼠随机分为对照组（control）,慢性间歇性低氧组（CIH）,复氧组（RH）。
CIH组和RH组在慢性间歇性低氧的动物模型中每天造模8h,持续4周,RH组的大鼠在常规下饲养3周,在建模结束时抽取大鼠动脉血立即行血气分析。空腹12h后静脉取血离心取上清液后用过氧化物酶法检测血清中血糖及放射免疫法检测大鼠血清胰岛素,ELISA法检测血清瘦素（leptin）和游离脂肪酸（FFA）。取出大鼠肾脏组织,q PCR法检测大鼠肾脏GLUT-2、IRS-2的m RNA表达,Western blotting法检测GLUT-2、IRS-2蛋白表达;免疫组化法检测大鼠肾脏GLUT-2、IRS-2蛋白表达。
结果:1.control组大鼠血氧饱和度≥95%,CIH组的血氧饱和度≤85%,RH组血氧饱和度≥86%;
2. CIH组大鼠空腹血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数较control组、RH组明显升高（P＜0.05）;RH组高于control组（P＜0.05）;
3. Leptin、FFA在CIH的浓度高于control组和RH组,（P＜0.05）;RH组高于control组,（P＜0.05）;
4. GLUT-2、IRS-2的m RNA表达在CIH组高于control组和RH组,（P＜0.05）;RH组高于control组,（P＜0.05）;
5. CIH组的GLUT-2、IRS-2的蛋白表达较control组和RH组升高（P＜0.05）;RH组高于control组（P＜0.05）；
结论:慢性间歇性低氧升高大鼠空腹血糖、胰岛素、leptin及FFA,上调大鼠肾脏GLUT-2、IRS-2的表达,增强胰岛素抵抗,降低胰岛素敏感性。
参考文献
[1]Circulating Endocannabinoids and Insulin Resistance in Patients with Obstructive Sleep Apnea[J].Xiaoya Wang,Qin Yu,Hongmei Yue,Jiabin Zhang,Shuang Zeng,Fenfen Cui,Hanrui Zhang.BioMed Research International.2016
[2]Obstructive sleep apnea is independently associated with inflammation and insulin resistance,but not with blood pressure,plasma catecholamines,and endothelial function in obese subjects[J].Luciene da Silva Araújo,Julia Freitas Rodrigues Fernandes,Márcia Regina Simas Torres Klein,Antonio Felipe Sanjuliani.Nutrition.2015(11-1)
[3]Sleep Fragmentation During Late Gestation Induces Metabolic Perturbations and Epigenetic Changes in Adiponectin Gene Expression in Male Adult Offspring Mice[J].Khalyfa,Abdelnaby,Mutskov,Vesco,Carreras,Alba,Khalyfa,Ahamed A,Hakim,Fahed,Gozal,David.Diabetes.2014(10)
[4]Sleep Apnea-Hypopnea Syndrome and Type 2 Diabetes.A Reciprocal Relationship?[J].Elisabet Martínez Cerón,Raquel Casitas Mateos,Francisco García-Río.Archivos de Bronconeumología（English Edition）.2014
[5]余维.慢性间歇性低氧对大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2及胰岛素受体底物2表达的影响[D].重庆医科大学,2017.