背景[1-3]
激活素受体样激酶1抗体是一类可以特异性结合激活素受体样激酶1的多克隆抗体，主要用于体外检测激活素受体样激酶1的免疫学实验。
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原刺激所产生的抗体称之为单克隆抗体（MonoclonalAntibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一种抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。
激活素受体样激酶1抗体
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一种抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
激活素受体样激酶1(ALK1)也称为ACVRL1，是TGF-β超家族的I型受体，具有2个配体BMP9和BMP10。ALK-1主要在内皮细胞中表达，在调节血管生成中起关键作用。
ALK-1主要在内皮细胞中表达，在调节发育和病理性血管生成中起关键作用。ALK-1蛋白,Human(97a.a,HEK293,Fc)在HEK293细胞中产生，由97个氨基酸(D22-Q118)组成，在C末端带有Fc标签。在存在TβR-II或激活素II型受体的情况下，ALK-1能够分别与TGF-β1或激活素结合。然而，ALK-1不会引发特定的转录反应。因此，ALK-1被认为是一种“孤儿”受体。
通过ALK-1的信号传导导致细胞内Smad 1/5/8级联的磷酸化，从而激活促血管生成转录因子，例如ID1和ID3。ALK-1与TGF-β1结合并磷酸化Smad1和Smad5。HepG2细胞中ALK-1的过表达抑制了ALK5介导的TGF-β1反应。ALK-1和ALK5之间的平衡可能对控制血管生成过程中内皮的特性至关重要。
BMP9/BMP10/ALK-1信号通过Smad4依赖性途径控制特定基因表达程序和枯否细胞(KCs)的存活。在功能上，ALK-1的缺失导致单增李斯特菌的捕获受损和大量播散性感染
应用[4][5]
激活素受体样激酶1抗体可以用于ALK1基因突变与HHT的致病关系与干预研究
探讨NM000020.2(ACVRL1):c.*2398G>A;rs2293092与遗传性出血性毛细血管扩张症(hereditary hemorrhagic telangiectasia,HHT)发病相关性以及has-mi R-188a-3p与has-mi R-6733-3p,has-mi R-199-5p是否通过rs2293092中G>A的突变来改变了与激活素受体样激酶1(activin receptor-like kinase 1,ACVRL1/ALK1)的结合,从而影响了ALK-1的蛋白表达,及其通过micro RNA达到精准治疗HHT的可能性。
方法:(1)以p EZX-FR02荧光素酶报告基因质粒系统为工具,分别构建p EZX-rs2293092-G(野生型)和p EZX-rs2293092-A(突变型)两个报告质粒,转染至HEK-293T细胞,通过报告基因检测试剂检测荧光。
(2) 通过生物信息学在线软件SNPinfo、micro RNA.org网站查到mi RNA has-mi R-199-5p,has-mi R-188a-3p与has-mi R-6733-3p可能与rs2293092位点G>A的纯合突变导致m RNA与micro RNA(mi RNA)的非正常结合。分别共转染至HEK-293T细胞,通过报告基因检测试剂检测荧光。
(3) 利用si RNA沉默ALK1基因。将si RNA-NC和si RNA-ALK1分别转染至HUVEC,48小时后提取细胞RNA,利用实时荧光定量PCR检测其变化。(4)利用si RNA沉默ALK1基因。将si RNA-NC和si RNA-ALK1分别转染至细胞,进行细胞成管实验和CCK8细胞增殖实验。
结果:(1)双荧光素酶基因报告检测结果表明,NM000020.2(ACVRL1):c.*2398G>A,rs2293092,ALK1的表达量降低。
(2) mi RNA has-mi R-199-5p,has-mi R-188a-3p与has-mi R-6733-3p与突变位点结合降低ALK-1的表达量。
(3) ALK1的表达量对内皮细胞的成管及增殖能力有重要影响。
结论:(1)ALK-1上可能的新的致病单核苷酸多态性(SNP)位点NM000020.2(ACVRL1):c.*2398G>A;rs2293092降低ALK-1的表达量;
(2)mi RNA has-mi R-199-5p,has-mi R-188a-3p与has-mi R-6733-3p与突变位点结合降低ALK-1的表达量。
参考文献
[1]High output cardiac failure in 3 patients with hereditary hemorrhagic telangiectasia and hepatic vascular malformations,evaluation of treatment[J].Olsen Lilian B.;Kjeldsen Anette D.;Poulsen Mikael K.;Kjeldsen Jens;Fialla Annette D..Orphanet Journal of Rare Diseases,2020(1)
[2]Hereditary Hemorrhagic Telangiectasia(HHT)and Survival:The Importance of Systematic Screening and Treatment in HHT Centers of Excellence.[J].de Gussem Els M;Kroon Steven;Hosman Anna E;Kelder Johannes C;Post Martijn C;Snijder Repke J;Mager Johannes J.Journal of clinical medicine,2020(11)
[3]Chromosomal translocation disrupting the SMAD4 gene resulting in the combined phenotype of Juvenile polyposis syndrome and Hereditary Hemorrhagic Telangiectasia.[J]..Molecular genetics&genomic medicine,2020(11)
[4]Development and Validation of the Nasal Outcome Score for Epistaxis in Hereditary Hemorrhagic Telangiectasia(NOSE HHT).[J].Peterson Andrew M.;Kallogjeri Dorina;Spitznagel Edward;Chakinala Murali M.;Schneider John S.;Piccirillo Jay F..JAMA otolaryngology--head&neck surgery,2020(11)
[5]秦丽丽.ALK1基因突变与HHT的致病关系与干预研究[D].内蒙古医科大学,2021.