BPC 157的作用与制备

2023/5/8 9:04:35 作者:谷雨

BPC-157 促进肌肉和韧带的再生,促进创面愈合,提高肌腱的硬度与弹性,改善促进胃部血液循环。研究表明,bpc-157在人体器官中有多种保护作用,如胰腺、肝损伤、内皮、心脏损伤和关节,使其成为一种多功能肽,能够给人类带来巨大的益处。胃部血液循环得到改善提高,对于健美运动员增肌的意义。

BPC 157

作用

BPC 157(body protection compound)为胃液肽(gastric juice peptide)的片段,由15个氨基酸组成,分子量1419。氨基酸序列为Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys-Pro-Ala-Asp-Asp-Ala-Gly-Leu-Val(甘-谷-脯-脯-脯-甘-赖-脯-丙-天冬-天冬-丙-甘-亮-缬)。BPC 157具有细胞保护、抗溃疡和抗炎作用,其作用和细胞保护、NO系统、细胞迁移有关。

制备方法

制备BPC157肽的方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)制备Fmoe-Val-WangResin

称取王氏树脂1g;Loading:1.0mmol/g,倒入反应柱中,加入10mlDMF,常温浸泡30分钟后用真空泵抽干,加入Fmoc-Val-OH 3.4g,DIC0.7ml,DMAP0.1g,DMF10ml,于常温反应2小时,再加入封闭试剂苯甲酰氯0.6ml, 吡啶0.4ml, DCM10ml常温反应0.5小时,树脂用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Val-WangResin;   

(2)制备Fmoc-Leu-Val-WangResin

在步骤(1)的Fmoe-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Leu-OH 0.7g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Leu-Val-WangResin;

(3)制备Fmoc-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(2)的Fmoc-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc- Gly-OH0.7g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Gly-Leu-Val-WangResin;

(4)制备Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(3)的Fmoc-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Ala-OH0.7g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(5)制备Fmoc-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(4)的Fmoc-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc- Asp(otBu)-OH1.2g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(6)制备Fmoc-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(5)的Fmoc-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Asp(otBu)-OH1.1g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(7)制备Fmoc- Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(6)的Fmoc-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Ala-OH0.7g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(8)制备Fmoc-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(7)的Fmoc-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Pro-OH0.8g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(9)制备Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(8)的Fmoc-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc- Lys(Boc)-OH1.1g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(10)制备Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(9)的Fmoc-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Gly-OH0.7g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(11)制备Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(10)的Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Pro-OH0.8g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(12)制备Fmoc-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(11)的Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Pro-OH0.8g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(13)制备Fmoc-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(12)的Fmoc-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc-Pro-OH0.8g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(14)制备Fmoc-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(13)的Fmoc-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc- Glu(otBu)-OH1.1g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(15)制备Fmoc-Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(14)的Fmoc-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,加入Fmoc- Gly -OH0.8g,DIEA0.4ml,TBTU0.56g,HOBT0.2g,DMF10ml常温反应1.5小时,用真空泵抽干,用异丙醇洗涤3次,DMF洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,抽干,获得Fmoc-Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(16) 制备Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin

在步骤(15)的Fmoc-Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin中,加入脱帽试剂,即20%哌啶的DMF溶液,常温反应5分钟,抽干,重新加入脱帽剂常温反应20分钟,用DMF洗涤3次,异丙醇洗涤3次,重蒸过的DMF洗涤2次,甲醇洗涤2次,用甲醇浸泡1小时,抽干,用氮气吹干树脂成干燥的颗粒,所得到的树脂为:Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin;

(17)制备粗品

把吹干的Gly-Glu(otBu)-Pro-Pro-Pro-Gly-Lys(Boc)-Pro-Ala-Asp(otBu)-Asp(otBu)-Ala-Gly-Leu-Val-WangResin倒入玻璃的切割瓶中,加入预冷的切肽试剂,即TFA9.5ml,H2O0. 5ml,常温反应1.5小时,过滤除去树脂,加冰乙醚500ml沉淀,3500转3分钟离心收集沉淀物,用乙醚洗涤3次,用纯水溶解后,低温冷冻干燥24小时,获得BPC157肽粗品;

(18)纯化

将步骤(17)的BPC157肽粗品1.23g溶于13ml水中,过滤,滤液上样于C18色谱柱,即 Kromasil-C18,20mm *250mm,流动相为如下A、B液体的混合物:A:0.1%三氟乙酸加99.9%水;B:0.1%三氟乙酸加99.9%乙腈;从A液体占混合物比例100%开始梯度洗脱,期间B液体占混合物比例逐渐升高,直至占100%,流速为10ml/min,检测波长为: 215nm;用相同条件下以实验室级别生产的少量纯品做对照指示目标峰,收集目标峰的流出液,浓缩冻干,获得BPC157。

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