背景[1-3]
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂属于高盐胰蛋白胨大豆琼脂，3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂可用于副溶血性弧菌的纯化培养和血清学试验时增菌培养。
胰蛋白胨大豆肉汤培养基/TSB（Tryptic Soy Broth）是加富培养基，广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡样芽孢杆菌的多管发酵法测定。
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂
胰蛋白胨大豆琼脂培养基/TSA（Tryptic Soy Agar）是一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养，也可用于阪崎肠杆菌的纯化培养和产黄色素试验。
培养基中胰蛋白胨、植物蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压；高含量氯化钠可以抑制非弧菌类细菌生长，不影响副溶血性弧菌生长；琼脂为凝固剂。
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂使用方法：
1.称取适量培养基，加蒸馏水至1 L，调节pH值至7.3±0.2；
2.推荐115℃，高压灭菌20 min，也可121℃高压灭菌15 min。
注意事项：
1.注意无菌操作，避免微生物污染。
2.根据菌株生长特性，可适当调整pH值。
3.该培养基仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其它用途。
4.称量时注意粉尘，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系统不适。
5.干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮结块。未开封产品保质期三年。开封后根据存放条件的不同保质时间存在一定的差异。
应用[4][5]
3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂可以用于胆盐胁迫下副溶血性弧菌的异质性研究
探究了50株不同来源的副溶血性弧菌在胆盐胁迫下的生长异质性,其次在生长异质性的基础上挑选合适的菌株进行其在胆盐胁迫下生物被膜形成异质性的研究,最后探究了胆盐胁迫下副溶血性弧菌的毒力异质性。
本研究的主要内容及结果如下:1.胆盐胁迫下副溶血性弧菌的生长异质性副溶血性弧菌是水产品中一种重要的食源性致病菌,一般通过进入人体胃肠道使人患病。在本研究中,模拟50株副溶血性弧菌(环境和临床菌株)在不同浓度胆盐的TSB中(0、0.03、0.10、0.20、0.30 g/100 m L胆盐的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB))的生长曲线,对其生长异质性进行比较。通过修正的Gompertz模型计算了生长动力学参数(比生长速率和延滞时间)。
结果表明,胆盐浓度为0.30 g/100 m L的时候菌株无法生长,通过扫描电镜观察到细菌的细胞壁和细胞膜受到严重的破坏。不同浓度的胆盐影响菌株的生长变异性,随着胆盐浓度的升高,副溶血性弧菌的μmax呈现下降的趋势,在胆盐浓度为0.03 g/100 m L的时候,部分菌株没有受到显著影响。环境菌株比临床菌株能更好地适应较低浓度胆盐的胁迫,临床菌株比环境菌株能更好地适应胆盐浓度较高的环境(0.20 g/100 m L)。环境菌株和临床菌株的延滞期都随着胆盐浓度的升高而逐渐延长,但是在胆盐浓度达到0.20 g/100 m L的时候,临床菌株的延滞期低于环境菌株。
通过对不同的基因型分析表明,基因型tlh+/tdh+/trh+的菌株在不同浓度胆盐的胁迫下,其变异性明显低于其他基因型,基因型tlh+/tdh-/trh+的菌株的变异性随着胆盐浓度的上升大幅度增加且在胆盐浓度达到0.20 g/100 m L的时候达到值,表现出更大的生长异质性。这些结果为开展副溶血性弧菌的精准风险评估提供理论支持。
2. 胆盐胁迫下副溶血性弧菌的生物被膜形成异质性面对胆盐的抗菌作用,食源性致病菌必须进化出应对其破坏性的策略才能在肠道中定植并发挥其致病性。在人体胃肠道中,致病菌除了降低其细胞膜的通透性来适应胆盐环境,还可以形成生物被膜来阻挡胆盐进入细胞。
在本研究中,详细分析了副溶血性弧菌在不同浓度胆盐胁迫下生物被膜的动态形成过程、临床和环境菌株被膜形成量的时间异质性、生物量和细胞活性异质性,并用激光扫描共聚焦显微镜对被膜结构进行了分析。
参考文献
[1]Recent advances in carbon-based nanomaterials for combating bacterial biofilm-associated infections..Cui Fangchao;Li Tingting;Wang Dangfeng;Yi Shumin;Li Jianrong;Li Xuepeng.Journal of hazardous materials,2022
[2]Differences in biofilm formation of Salmonella serovars on two surfaces under two temperature conditions..Obe Tomi;Richards Amber K;Shariat Nikki W.Journal of applied microbiology,2021
[3]Comparison on the growth heterogeneity of Vibrio parahaemolyticus coupled with strain sources and genotypes analyses in different oligotrophic conditions..Shi Jun;Zhao Wei;Xie Jing;Zhu Yongheng;Pan Yingjie;Ou Jie;Zhao Yong;Liu Haiquan.Journal of food protection,2021
[4]Metabolic Alterations in Shrimp Stomach During Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease and Effects of Taurocholate on Vibrio parahaemolyticus.Kumar Ramya;Tung Teng Chun;Ng Tze Hann;Chang Che Chih;Chen Yi Lun;Chen Yi Min;Lin Shih Shun;Wang Han Ching.Frontiers in Microbiology,2021
[5]赵伟.胆盐胁迫下副溶血性弧菌的异质性研究[D].上海海洋大学,2022.