背景[1-3]
人前列腺癌细胞该细胞由Horoszewicz JS于1977年从一名50岁的明确诊断为转移性前列腺癌的白人男性患者的左锁骨上淋巴结细针穿刺的活体组织中分离建立的。5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长，所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞；该细胞贴壁不牢，达不到汇合状态，而且会使培养基迅速变酸；传代后48h内一定要保持培养瓶静止.如果此时挪动培养瓶，会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况，需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁，细胞贴壁后可更换培养基。
人前列腺癌细胞
人前列腺癌细胞操作规程：
一．人前列腺癌细胞培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO，货号11995-065)，95%；优质胎牛血清，5%，添加0.1U/ml胰岛素。
2）人前列腺癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）人前列腺癌细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．人前列腺癌细胞处理：
1）复苏人前列腺癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）人前列腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
3）人前列腺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。
应用[4][5]
人前列腺癌细胞可以用于MALT1基因对人前列腺癌细胞生物学行为影响的研究
探究淋巴组织淋巴瘤易位蛋白1(Mucosa Associated Lymphoid Tissue Lymphoma Translocation Protein 1,MALT1)对前列腺癌细胞增殖、生长、凋亡、迁移及侵袭能力与体内成瘤能力的影响。
方法:通过q RT-PCR(Quantitative real time PCR)和Western blot的方法检测MALT1在不同前列腺癌细胞系LNCa P、DU-145、PC-3和前列腺上皮细胞系RWPE-1之间的表达差异。分别用构建MALT1基因特异性RNA干扰慢病毒载体(sh MALT1)和对应的对照载体(sh Ctrl),感染前列腺癌细胞系(PC-3和LNCa P细胞),并设置为MALT1敲减组(sh MALT1组)与阴性对照组(sh Ctrl组),通过q RT-PCR以及Western blot技术分别检测被转染细胞中MALT1 m RNA、MALT1蛋白的表达水平,验证敲减效果。在细胞模型构建的基础上,两组分别采用MTT实验、平板克隆实验、流式细胞术、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测MALT1表达改变对前列腺癌细胞增殖、集落形成、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。此外,于SPF级别条件饲养裸鼠,将sh MALT1和sh Ctrl慢病毒感染的处于对数生长期的LNCa P细胞接种于BALB/C裸鼠皮下,构建小鼠异种移植瘤模型,分别设置为sh MALT1组与sh Ctrl组。在移植瘤模型构建的基础上,动态观察皮下肿瘤的生长情况,于第31天处死裸鼠后取瘤体称重,并通过免疫组化法检测瘤体组织中Ki-67蛋白的表达情况。
结果:q RT-PCR和Western blot实验证实MALT1在多种前列腺癌细胞系中的表达显著高于前列腺上皮细胞株RWPE-1(P<0.001)。在LNCa P和PC-3细胞系中敲低MALT1后,sh MALT1组的细胞MALT1 m RNA的表达较sh Ctrl组明显减少(P<0.001)。在sh MALT1组中,两种细胞系的增殖、集落形成、侵袭和转移能力受到明显抑制,且凋亡率较sh Ctrl组明显增加(P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示sh MALT1组的裸鼠肿瘤体积和重量较sh Ctrl组明显减小(P<0.001),此外,sh MALT1组裸鼠移植瘤组织的Ki-67表达阳性率比sh Ctrl组更低(P<0.001)。
结论:体外实验表明,抑制MALT1的表达可抑制前列腺癌细胞的增殖、集落形成、转移,并促进前列腺癌细胞凋亡。裸鼠成瘤实验结果证明,抑制MALT1后裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,成瘤性明显下降。提示MALT1可以促进前列腺癌的发生发展,并可能是治疗前列腺癌的潜在分子靶标。
参考文献
[1]Association of Molecular Subtypes With Differential Outcome to Apalutamide Treatment in Nonmetastatic Castration-Resistant Prostate Cancer..Feng Felix Y;Thomas Shibu;Saad Fred;Gormley Michael;Yu Margaret K;Ricci Deborah S;Rooney Brendan;BrookmanMay Sabine;McCarthy Sharon;Olmos David;Chowdhury Simon;Hadaschik Boris;Liu Yang;Davicioni Elai;Smith Matthew R;Small Eric J.JAMA oncology,2021
[2]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries.Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021
[3]Modern biomarkers in prostate cancer diagnosis..Porzycki Paweł;Ciszkowicz Ewa.Central European journal of urology,2020
[4]MALT1 is a potential therapeutic target in glioblastoma and plays a crucial role in EGFR-induced NF-κB activation..Liu Xuejiao;;Yue Chenglong;;Shi Lin;;Liu Guanzheng;;Cao Qiyu;;Shan Qianqian;;Wang Yifeng;;Chen Xiangyu;;Li Huan;;Wang Jie;;Gao Shangfeng;;Niu Mingshan;;Yu Rutong.Journal of cellular and molecular medicine,2020
[5]谭皓天.MALT1基因对人前列腺癌细胞生物学行为影响的研究[D].青岛大学,2023.
参考文献
[1]Association of Molecular Subtypes With Differential Outcome to Apalutamide Treatment in Nonmetastatic Castration-Resistant Prostate Cancer..Feng Felix Y;Thomas Shibu;Saad Fred;Gormley Michael;Yu Margaret K;Ricci Deborah S;Rooney Brendan;BrookmanMay Sabine;McCarthy Sharon;Olmos David;Chowdhury Simon;Hadaschik Boris;Liu Yang;Davicioni Elai;Smith Matthew R;Small Eric J.JAMA oncology,2021
[2]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries.Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021
[3]Modern biomarkers in prostate cancer diagnosis..Porzycki Pawe?;Ciszkowicz Ewa.Central European journal of urology,2020
[4]MALT1 is a potential therapeutic target in glioblastoma and plays a crucial role in EGFR-induced NF-κB activation..Liu Xuejiao;;Yue Chenglong;;Shi Lin;;Liu Guanzheng;;Cao Qiyu;;Shan Qianqian;;Wang Yifeng;;Chen Xiangyu;;Li Huan;;Wang Jie;;Gao Shangfeng;;Niu Mingshan;;Yu Rutong.Journal of cellular and molecular medicine,2020
[5]谭皓天.MALT1基因对人前列腺癌细胞生物学行为影响的研究[D].青岛大学,2023.