背景[1-3]
ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系是由一位63岁的女性患者的宫颈组织中建立的。这种细胞系具有正常的核型，可以稳定地传代并保持其特性。它们通常被用于研究人类子宫颈癌的病因和病理生理机制，以及测试新的预防和治疗策略。
ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系也是由人宫颈组织建立的，但ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系是永生化细胞系。这意味着它们可以在体外无限期地生长和分裂，而不会衰老或死亡。这种特性使得ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系成为研究人类子宫颈癌细胞生物学和探索癌症治疗策略的理想模型。
ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系
ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系培养步骤：
1）复苏ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
3）ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。
应用[4-5]
ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系可以用于长链非编码RNA在HPV16阳性的宫颈细胞系中的表达
分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型阳性的宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞系(SiHa)和ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系中长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)及信使RNA(Messenger RNA,mRNA)的表达差异,为探索研究lncRNAs的表达改变在高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)感染导致CC发生发展中的重要作用及其可能的分子机制奠定基础。
方法:常规培养SiHa细胞和ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞;提取RNA(Trizol方法)、纯化(mRNA-ONLY?Eukaryotic mRNA Isolation Kit,Epicentre)及质量检测(Agilent ND-1000及标准变性凝胶电泳方法);RNA标记(Arraystar RNA Flash Labeling Kit)与芯片杂交(Agilent SureHyb仪和Agilent DNA Microarray Scanner扫描软件);数据采集(Agilent Feature Extraction v11.0.1.1)软件)及其标准化(Agilent GeneSpring GX v12.1软件)后行差异表达分析(Agilent GeneSpring GX v12.1软件)以及功能分析(GO和KEGG通路分析);以RT-PCR方法验证SiHa细胞系与ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞、HPV16阳性的宫颈癌组织、HPV16阳性的正常宫颈组织以及HPV16阳性的宫颈癌前病变组织中与本实验室前期工作结果中筛选出的差异改变细胞因子相关的LncRNAs的芯片实验结果。
结果:1.SiHa细胞系与ECT1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞系细胞相比差异表达2倍及以上的上调lncRNAs共2804条,约占总上调LncRNAs的11.9%,差异表达2倍及以上的下调lncRNAs共2372条,约占总下调LncRNAs的12.1%。差异表达2倍及以上的上调mRNAs共2405条,约占总上调mRNAs的28.6%,差异表达2倍及以上的下调mRNAs共2505条,约占总下调mRNAs的27.4%;2.SiHa细胞系表达上调的mRNAs中,生物学过程类中富集多细胞生物过程调节的mRNAs所占比例最大;细胞组分类中富集部分胞内组成的mRNAs所占比例最大;分子功能类中富集结合能力的mRNAs所占比例最大;3.SiHa细胞系表达下调的mRNAs中,生物学过程类中富集单一有机体调节过程的mRNAs所占比例最大;细胞组分类中富集胞内构成的mRNAs所占比例最大;分子功能类中富集蛋白结合能力的mRNAs所占比例最大。
参考文献
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