背景[1-3]
HMO6人小胶质细胞系是一种来源于人脑小胶质细胞的实验细胞系，通常用于研究人脑小胶质细胞的功能和特性。这种细胞系具有多向分化能力，能够分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等神经细胞类型。
HMO6人小胶质细胞系的保存和应用需要使用低温冷藏和液氮保存的方法，以保持细胞的活性和稳定性。同时，为了防止污染造成的损失，最小化连续细胞系的遗传改变，该细胞系通常需要进行定期的传代和冻存。
HMO6人小胶质细胞系是一种来源于人脑的小胶质细胞系。小胶质细胞是中枢神经系统的一种胶质细胞，主要负责支持和保护神经元，并参与神经元的修复和再生。
HMO6人小胶质细胞系
HMO6人小胶质细胞系的特点包括：
形态特征：HMO6人小胶质细胞呈多角形或长条形，大小约为10-20微米左右。
功能特征：HMO6人小胶质细胞具有多种生物学功能，包括支持和保护神经元、参与神经元的修复和再生、分泌多种神经营养因子等。
纯度特征：HMO6人小胶质细胞通常具有较高的纯度，即没有其他类型的细胞混杂在其中。这对于后续的实验研究非常重要，因为只有纯度高的细胞才能保证实验结果的准确性和可靠性。
来源特征：HMO6人小胶质细胞通常来源于人脑组织，可以通过手术或穿刺等方式获取。这些方法相对安全、简单，并且可以获得足够数量的细胞进行实验研究。
HMO6人小胶质细胞系培养操作
1)复苏HMO6人小胶质细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)HMO6人小胶质细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)HMO6人小胶质细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
HMO6人小胶质细胞系可以用于利用全外显子组测序发现神经精神狼疮致病变异及其致病机制研究
.TNFAIP3(c.1 806delG)的致病机制研究首先,为明确突变蛋白在先证者体内的表达情况,采集了先证者及2例正常对照者的PBMCs。Western Blot结果显示先证者外周血T细胞及单核细胞中野生型A20蛋白表达低于正常对照者;先证者外周血T细胞及单核细胞中突变型A20蛋白表达高于野生型A20蛋白。其次,通过将构建的TNFAIP3(c.1806delG)表达载体及K63连接泛素载体共转染到HEK293T并进行免疫共沉淀实验,我们证实了突变型A20蛋白的去泛素化功能受损。
为探索TNFAIP3(c.1806delG)对外周血免疫细胞功能的影响,本研究应用Western Blot发现先证者T细胞及单核细胞NF-κB通路蛋白磷酸化水平高于正常对照者,并更容易被TNF-α刺激活化;RT-PCR结果显示先证者PBMCs中NF-κB下游炎症因子相对表达水平明显高于无神经精神症状的SLE患者和正常对照者,且在TNF-α刺激后进一步升高。这些结果表明TNFAIP3(c.1806delG)使外周血免疫细胞NF-κB通路活化并促炎因子分泌增多。最后,本研究对TNFAIP3(c.1806delG)在神经免疫中的致病机制进行探索。在模拟血-脑屏障的细胞系中,Western Blot结果显示,转染突变型TNFAIP3载体的HUVEC在受到TNF-α刺激后NF-κB通路明显激活,紧密连接和粘附连接蛋白表达降低;HMO6人小胶质细胞系RT-PCR结果显示,转染突变型TNFAIP3载体的NHA受到TNF-α刺激后促炎因子相对表达水平明显升高。在转染突变型TNFAIP3载体的HMO6人小胶质细胞系中,RT-PCR结果显示静息状态下促炎因子相对表达水平明显升高。
这些结果说明TNEAIP3(c.1806delG)通过影响血-脑屏障通透性及中枢神经系统固有免疫细胞的活化状态对神经系统发挥致病作用。创新性和意义本研究在一个表型罕见的NPSLE家系中发现了TNFAIP3(c.1806delG)这一致病变异,初步探索了它在系统性免疫和神经免疫中发挥的作用,发现了该突变通过激活外周血和中枢神经系统固有免疫细胞、破坏血-脑屏障等多个环节导致NPSLE的致病机制,为个体化治疗和NPSLE发病机制研究提供了理论基础和研究方向。
参考文献
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[3]Astrocyte Crosstalk in CNS Inflammation..Linnerbauer Mathias;Wheeler Michael A;Quintana Francisco J.Neuron,2020
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