背景[1-6]
Linifanib(VEGFR抑制剂)是一种多靶点VEGF和PDGFR受体家族的抑制剂，抑制KDR，Flt-1，PDGFRβ和FLT3的IC50值分别为3，4，66，4 nM。在体内实验中对于VEGF和PDGF受体家族的成员，Linifanib显示IC 50值为4nM（KDR）至190nM（FLT4）。Linifanib对TIE2和RET的作用较小，但对其他非相关酪氨酸激酶（如类固醇受体辅激活因子和表皮生长因子受体）的活性较低（IC 50>10μM）。
在工程化表达人KDR的3T3鼠成纤维细胞中，Linifanib抑制VEGF诱导的KDR的磷酸化，IC 50为4 nM。当HUAEC用作靶细胞时，Linifanib可观察到抑制受体自身磷酸化的类似效力。Linifanib在10 nM时完全抑制VEGF刺激的KDR磷酸化，在3 nM时完全抑制70％（IC 50=2 nM）。在体外实验中Linifanib在VEGF诱导的子宫水肿（ED 50=0.5 mg/kg）和角膜血管生成的基于机制的鼠模型中有效口服。
ABT-869在人纤维肉瘤和乳腺癌，结肠癌和小细胞肺癌异种移植模型（ED 50=1.5-5 mg/kg，每天两次）中具有疗效，并且在原位乳腺和胶质瘤模型中也有效。分别在表皮样癌和白血病异种移植模型中观察到肿瘤大小减小和肿瘤消退。
linifanib的合成方法：以2-氟-5-甲基苯胺为起始原料,经3步反应制得中间体N-(4-硼酸频哪醇酯苯基)-N’-(2-氟-5-甲基苯基)脲(5);以2,6-二氯苯腈为起始原料,经关环反应制得另一中间体3-氨基-4-氯-吲唑(7);中间体5和7经Suzuki偶联反应得到目标化合物linifanib。结果与结论目标化合物和中间体的结构经1H-NMR、MS谱确证,总收率为11.4%。
应用[7][8]
Linifanib(VEGFR抑制剂)可用于Linifanib诱导肝癌细胞保护性自噬及机制研究：
在肝癌细胞保护性自噬及机制研究中Linifanib(ABT-869)是一种多靶点的受体酪氨酸激酶抑制剂,主要选择性的作用于VEGFR和PDGFR家族。linifanib在临床前研究和II期临床试验中对肝癌表现出显著的抗肿瘤作用。
研究方法：通过Western blot分析linifanib处理后肝癌细胞Bel-7404、HepG2中自噬关键基因表达情况；进一步采用免疫荧光、透射电镜观察linifanib处理后自噬潮、自噬体的变化情况；采用Western blot分析linifanib处理后肝癌细胞PDGFR-β及其下游Akt/mTOR和Mek/Erk表达情况；采用MTS方法观察自噬抑制剂或下调自噬关键基因ATG5、ATG7抑制自噬对linifanib的增敏作用；采用FcM观察细胞凋亡情况；采用肝癌裸鼠移植瘤模型观察自噬抑制剂对linifanib的增敏作用。
结论多靶点酪氨酸激酶抑制剂linifanib诱导肝癌细胞保护性自噬发生。下调PDGFR-β及其下游Akt/mTOR和Mek/Erk磷酸化是linifanib诱导保护性自噬的潜在机制。抑制自噬促进linifanib体内外对肝癌细胞的增殖抑制作用,提高细胞凋亡率,而并不增加肝脏毒性。
参考文献
[1] Albert DH,et al.Preclinical activity of ABT-869,a multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitor.Mol Cancer Ther,2006,5(4),995-1006.
[2] Albert,D.H.;Tapang,P.;Magoc,T.J.;Pease,L.J.;Reuter,D.R.;Wei,R.Q.;Li,J.;Guo,J.;Bousquet,P.F.;Ghoreishi-Haack,N.S.;Wang,B.;Bukofzer,G.T.;Wang,Y.C.;Stavropoulos,J.A.;Hartandi,K.;Niquette,A.L.;Soni,N.;Johnson,E.F.;McCall,J.O.;Bouska,J.J.;Luo,Y.;Donawho,C.K.;Dai,Y.;Marcotte,P.A.;Glaser,K.B.;Michaelides,M.R.;Davidsen,S.K.(2006)."Preclinical activity of ABT-869,a multitargeted receptor tyrosine kinase inhibitor".Molecular Cancer Therapeutics.5(4):995–1006.
[3] Guo,J.;Marcotte,P.A.;McCall,J.O.;Dai,Y.;Pease,L.J.;Michaelides,M.R.;Davidsen,S.K.;Glaser,K.B.(2006)."Inhibition of phosphorylation of the colony-stimulating factor-1 receptor(c-Fms)tyrosine kinase in transfected cells by ABT-869 and other tyrosine kinase inhibitors".Molecular Cancer Therapeutics.5(4):1007–1013.
[4] 抗肿瘤药物linifanib的合成[J].刘海龙,朱五福,果秋婷,王建强,王晓,宫平.中国药物化学杂志.2012(01)
[5] Phase II Trial of Palliative Radiotherapy for Hepatocellular Carcinoma and Liver Metastases[J].Hany Soliman,Jolie Ringash,Haiyan Jiang,Kawalpreet Singh,John Kim,Robert Dinniwell,Anthony Brade,Rebecca Wong,James Brierley,Bernard Cummings,Camilla Zimmermann,Laura A.Dawson.Journal of Clinical Oncology.2013(31)
[6] [2]Molecular Mechanisms of HBV-Associated Hepatocarcinogenesis[J].Francesca Guerrieri,Laura Belloni,Natalia Pediconi,Massimo Levrero.Semin Liver Dis.2013(02)
[7] [3]Inhibition of autophagy enhances anticancer effects of bevacizumab in hepatocarcinoma[J].Xian-ling Guo,Ding Li,Kai Sun,Jin Wang,Yan Liu,Jian-rui Song,Qiu-dong Zhao,Shan-shan Zhang,Wei-jie Deng,Xue Zhao,Meng-chao Wu,Li-xin Wei.Journal of Molecular Medicine.2013(4)
[8] 王章桂.Linifanib诱导肝癌细胞保护性自噬及机制研究[D].浙江大学,2014.