长春花是夹竹桃科长春花属一种重要的药用植物,其中含有几十种吲哚类生物碱,长春碱是其中的一种,具有抗癌的作用,为临床上广泛应用的抗肿瘤药物,具有很高的药用价值,国内外对其提取分离的研究由来已久。但是由于长春花中含有几十种生物碱,长春碱含量很低,仅为万分之几,提取并初步成盐后的硫酸长春碱粗品含量仅60%左右,无法满足使用要求,需要对其进一步纯化。
目前报道的长春碱的提取方法有溶剂提取法、超临界萃取法、超声波提取法等,分离方法有TLC法、柱色谱法、高效逆流色谱法等。这些方法各有自己的优势和缺点,如果能对这些方法进行改进和结合,提高长春碱的提取率和纯度,将会更有利于其工业化应用。
专利 CN104262362B 公开了一种长春碱的提取及纯化方法,步骤如下:
(1)取长春花,用15-25wt%的氯化钠水溶液超声浸泡15min,然后取出直接放入流速为5-8m/s的-20℃的冷空气中冷冻干燥20min,冷冻干燥后将长春花粉碎。
(2)将步骤(1)的长春花加入30%体积分数的乙醇中,用柠檬酸调节pH为1.5,回流提取,过滤取滤液,将滤液用氢氧化钠调整pH为8-9,然后以喷雾的形式从萃取罐顶部喷入,同时将萃取剂以喷雾的形式从萃取罐的底部喷入,喷入完毕萃取收集有机相;所述萃取剂为体积比为10:1-2.5的三氯乙烯和己烷的混合物;
(3)有机相减压除去溶剂,固体用乙醇完全溶解,加浓度5wt%的硫酸的乙醇溶液调节pH为3.8,离心、干燥得硫酸长春碱粗品;
(4)将硫酸长春碱粗品用水溶解,加饱和碳酸氢钠溶液调节pH为8-9,加入二氯甲烷萃取,二氯甲烷有机相用水洗涤直至洗涤后的水相透明无色,收集水洗后的有机相,减压蒸馏除去二氯甲烷,所得剩余物上硅胶柱,用体积比为90:10~98:2的二氯甲烷与甲醇氨饱和溶液的混合物作为流动相进行洗脱,收集无色馏分,将馏分减压蒸馏至干,所得固体加入体积比为9:0.3-0.8:1-3的甲醇、石油醚和乙酸乙酯的混合液中,常温超声5min,然后在-10℃低温静置24h,所得晶体在-10℃低温抽滤,-10℃冻干,得长春碱纯品。
此方法步骤简洁、耗用时间少,先对长春花进行预处理再进行提取,不仅可以除掉长春花部分溶于水的色素杂质,而且可以使长春花细胞壁破碎,更利于下步产品的溶出。通过对提取步骤和条件的选择,提高了硫酸长春碱粗品的得率和含量,通过对各提取试剂、萃取试剂、洗脱试剂和结晶试剂的选择,提高了长春碱的收率和纯度,通过一次结晶即可得到长春碱纯品,简化了纯化过程,更为快速的实现了长春碱的分离和纯化,且最终得到的产品纯度高,更为满足临床需求。