L-乳酸脱氢酶主要作用是催化乳酸氧化为丙酮酸，将氢转移给NAD成为NADH。乳酸脱氢酶广泛存在于人体各组织中，最多见于心肌、骨骼肌和红细胞。
生化反应
L-乳酸脱氢酶（L-lactate dehydrogenase，EC 1.1.1.27 是一种以NAD+或NADP+为受体、作用于供体CH-OH基团上的氧化还原酶。这种酶能催化以下酶促反应：
(S)-乳酸 + NAD+ ⇌ 丙酮酸 + NADH + H+
在动物细胞中NADP+也代替NAD+参与上述反应，只是反应速率较慢，而细菌则不能用NADP+替代NAD+。这种酶也能氧化其他(S)-2-羟基单羧酸。L-乳酸脱氢酶与D-乳酸脱氢酶统称“乳酸脱氢酶”。
测定方法
1.乳酸脱氢酶的测定
乳酸脱氢酶催化乳酸氧化为丙酮酸为可逆反应，正反两个方向的反应均能测定。但逆反应测得的乳酸脱氢酶活性比正反应高得多，所以采用不同的测定方法得出的结果也会不同。
2.乳酸脱氢酶同工酶测定
乳酸脱氢酶同工酶的测定方法有电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法。