背景[1-3]
NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系是一种用于研究和了解甲状腺正常细胞功能的实验细胞系。该细胞系是通过将正常的人甲状腺组织进行体外培养和转化而建立的，具有维持甲状腺细胞生长和分化的能力。
NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系具有以下特点：
来源可靠：该细胞系来自正常的甲状腺组织，经过体外培养和转化而来，因此来源可靠，具有较好的生物学特性。
生长特性稳定：NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系具有稳定的生长特性，能够进行长期传代培养，有利于实验的重复性和可靠性。
用于科研实验：该细胞系主要用于科研实验，可以用于研究甲状腺细胞的生物学特性、功能和调控机制等方面，为甲状腺疾病的研究和治疗提供有价值的实验模型。
操作简便：NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系培养操作简便，易于进行各种类型的实验操作，如基因表达分析、蛋白质组学分析等。
总之，NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系是一种重要的实验细胞系，为甲状腺相关领域的研究提供了有力的支持。通过该细胞系的研究，可以更深入地了解甲状腺细胞的生物学特性和功能，为甲状腺疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。
NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系
NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系培养操作
1)复苏NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系可以用于硫酸镍诱导甲状腺组织和细胞的自噬及机制探讨
通过观察不同剂量硫酸镍(Nickel sulfate,NiSO4)染毒大鼠甲状腺组织自噬相关指标表达水平,以期阐明自噬在镍暴露环境中对大鼠甲状腺组织的影响及意义;检测镍暴露环境下大鼠甲状腺功能和组织形态学的变化,评估NiSO4对大鼠甲状腺功能及组织代谢损伤的毒性效应;通过观察不同浓度NiSO4对体外培养的人源性甲状腺滤泡上皮细胞(NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系)生长情况的影响,明确NiSO4对人甲状腺细胞造成损伤的剂量效应关系;
探讨NiSO4对甲状腺代谢的影响及可能机制,为预防环境镍暴露造成的甲状腺代谢损伤提供理论依据。
方法1.32只SPF级健康雄性Wistar大鼠按照体重分层随机分为4组:正常对照组(生理盐水5 m L/kg)、低剂量组(NiSO4溶液2.5 mg/kg)、中剂量组(NiSO4溶液5.0 mg/kg)和高剂量组(NiSO4溶液10.0 mg/kg),每组8只,腹腔注射1次/日,连续40日。采用免疫组织化学法检测自噬标志分子LC3B、Beclin1和p62蛋白的表达;RT-PCR法检测甲状腺组织自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12、LC3B、p62和Beclin1 m RNA的表达;并观察不同剂量NiSO4染毒后大鼠甲状腺功能及甲状腺组织形态学变化。
2. 本研究采用人NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞系,通过CCK-8法检测不同浓度NiSO4对NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞生长的影响,流式细胞仪检测NiSO4对NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞周期分布的影响,筛选出NiSO4的适宜损伤浓度,构建NiSO4损伤的人甲状腺细胞模型。
3. 使用倒置相差显微镜观察NiSO4干预后NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞在形态学上的变化,透射电镜进一步观察细胞的超微结构,荧光显微镜观察MDC染色后细胞内自噬的发生,应用Western blot检测自噬分子标记蛋白LC3、p62和Beclin1的表达,进而从蛋白质水平检测NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞自噬水平的变化。
4. 分别使用自噬的抑制剂3-MA和自噬的诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)联合NiSO4干预NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞,调控NiSO4诱导的自噬,采用PI染色检测其对NiSO4诱导的NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞死亡率的影响,应用Annexin V-FITC/PI双染法观察其对NiSO4诱导的NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞凋亡率的影响,并应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,进而探讨NiSO4诱导的细胞自噬与凋亡之间的关系。
5.使用NF-κB p65转录因子测定试剂盒检测NF-κB信号转导通路的活性,并应用Western blot检测NF-κB信号转导通路相关蛋白IκBα、p-IκBα、IKKβ、p-IKKβ及p65的表达水平,探讨NiSO4诱导NTHY-ORI 3-1人甲状腺正常细胞系细胞自噬的可能调控机制。
参考文献
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