背景[1-3]
HSC-4人口腔鳞癌细胞系是一种用于研究和治疗口腔鳞状细胞癌的实验细胞模型。这种细胞系是从口腔鳞状细胞癌组织中分离出来的，经过一定的培养条件，可以在实验室中培养和繁殖。
HSC-4人口腔鳞癌细胞系是一种从人口腔鳞状细胞癌组织中分离出的细胞系。该细胞系具有以下特点：
形态特征：HSC-4人口腔鳞癌细胞呈多角形或长条形，大小不一，有明显的核仁和胞质。
生长特性：HSC-4人口腔鳞癌细胞具有较强的增殖能力，可以在体外持续传代，并且可以在体内形成肿瘤。
基因表达：HSC-4人口腔鳞癌细胞通常表达多种与口腔鳞状细胞癌相关的基因，如EGFR、VEGF等。
HSC-4人口腔鳞癌细胞系的形态为上皮细胞样，具有贴壁生长的特性。这些细胞可以用于研究口腔鳞状细胞癌的生物学特性、药物筛选和肿瘤治疗等方面的实验。通过观察细胞的生长、增殖和凋亡等生物学行为，可以深入了解口腔鳞状细胞癌的发生、发展和转移机制，为口腔鳞状细胞癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。
HSC-4人口腔鳞癌细胞系在生物学研究中具有广泛的应用价值，例如用于研究口腔鳞状细胞癌的发生和发展机制、筛选抗肿瘤药物、评估治疗效果等。同时，由于口腔鳞状细胞癌是口腔常见的恶性肿瘤之一，因此HSC-4人口腔鳞癌细胞系也被广泛应用于口腔鳞状细胞癌的研究中。
HSC-4人口腔鳞癌细胞系
HSC-4人口腔鳞癌细胞系培养操作
1)复苏HSC-4人口腔鳞癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)HSC-4人口腔鳞癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)HSC-4人口腔鳞癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
HSC-4人口腔鳞癌细胞系可以用于TAE226对口腔鳞状细胞癌细胞上皮间质转化的影响
研究黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)抑制剂TAE226对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)HSC-3细胞和HSC-4人口腔鳞癌细胞系的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程和转移是否有抑制作用并初步探讨其作用机制,期望为口腔鳞癌的药物靶向治疗提供一定的理论依据。
方法:为排除细胞个体差异性,本实验采用HSC-3细胞和HSC-4人口腔鳞癌细胞系两种口腔鳞癌细胞株进行实验。
1. 采用Real-time q PCR技术检测口腔鳞癌细胞在TAE226作用下EMT相关因子的m RNA水平。用含不同浓度TAE226(1μM、5μM、10μM)的培养液培养HSC-3细胞和HSC-4人口腔鳞癌细胞系,实验另设对照组(未加TAE226),分别在培养24h、48h、72h后检测细胞中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、上皮标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin)和间质标志物波形蛋白(vimentin)的m RNA的相对表达量。
2. 采用Western Blot技术检测口腔鳞癌细胞中EMT的相关蛋白在TAE226作用下的表达情况。浓度分别为0、1μM、5μM、10μM的TAE226作用于HSC-3细胞和HSC-4人口腔鳞癌细胞系48h后,通过Western Blot技术比较不同浓度组的TGF-β、E-钙粘蛋白、波形蛋白的蛋白水平。
结果:1.q RT-PCR实验结果显示:TAE226促进了HSC-3细胞和HSC-4人口腔鳞癌细胞系的E-钙粘蛋白m RNA的表达且抑制了TGF-βm RNA和波形蛋白m RNA表达。两细胞系中对照组的TGF-βm RNA和波形蛋白m RNA表达量随着时间延长有增高趋势而E-钙粘蛋白m RNA表达则有下降趋势(P<0.05)。当TAE226作用时间为24h时,1μM组的波形蛋白和TGF-β在HSC-4人口腔鳞癌细胞系中的表达量和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余实验组中TGF-β和波形蛋白均低于对照组而E-钙粘蛋白高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。将实验组进一步两两比较,同一时间下,随着TAE226浓度从1μM增加到5μM、10μM时,E-钙粘蛋白m RNA的相对表达量逐渐升高,TGF-βm RNA、波形蛋白m RNA的相对表达量则均逐渐降低,且差异均有统计学意义(P<0.05);在同一浓度下,TAE226的作用时间从24h延长至48h、72h时,E-钙粘蛋白m RNA的相对表达量逐渐升高,TGF-βm RNA、波形蛋白m RNA的相对表达量也均逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。
2.Western Blot实验结果显示在TAE226作用48h后,0、1μM、5μM、10μM组HSC-3和HSC-4人口腔鳞癌细胞系的E-钙粘蛋白蛋白表达逐渐增高,TGF-β蛋白和波形蛋白蛋白表达量逐渐下降,且差异有统计学意义(P<0.05),即TAE226促进了两细胞株的E-钙粘蛋白蛋白表达,抑制了两细胞株TGF-β和波形蛋白的蛋白表达量,且促进或抑制效果与TAE226剂量有关,随着TAE226剂量增高其抑制作用更明显。3.TGF-β与E-cadherin、波形蛋白在口腔鳞癌HSC-3细胞和HSC-4人口腔鳞癌细胞系中表达的相关性分析结果。
参考文献
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